طراحي آزمون PCR جهت تشخيص ويروس هپاتيت B و ارزيابي عملكرد اين آزمون در غربالگري مراجعين به سازمان انتقال خون

The designation of PCR test to detect hepatitis B virus and evaluate the performance of this test in screening applicants of blood transfusion organization

هپاتيت B از جمله ويروس هاي شايعي است كه يكي از راه هاي انتقال آن خون و فرآورده هاي خوني مي باشد. هدف از اين پژوهش طراحي آزموني است بر اساس واكنش زنجيره اي پلي مرازي (PCR) كه بتوان از آن به منظور تشخيص ويروس هپاتيت B در نمونه هاي باليني استفاده نمود. در اين مطالعه يك نمونه ي خون با بار مشخص ويروس تهيه شد تا قابليت جفت پرايمر طراحي شده در تشخيص ويروس مورد ارزيابي قرار گيرد. همچنين اختصاصيت آن نيز علاوه بر بررسي بيوانفورماتيكي، با آزمون عليه سه ويروس شايع ديگر تا حدي تاييد گرديد. همچنين از اين روش در غربالگري مراجعين سازمان انتقال خون كاشان نيز استفاده گرديد و نتايج آن با نتايج حاصل از روش متداول در اين سازمان مقايسه شد. نتايج اين مطالعه نشان داد كه جفت پرايمر طراحي شده بطور اختصاصي ژنوم ويروس هپاتيت B را تكثير مي نمايد و حساسيت آن در حدود 100 ذره ي ويروس در هر ميلي ليتر خون است كه نزديك به سه برابر حساس تر از روش الايزاي متداول در سازمان انتقال خون است. همچنين در نمونه هاي باليني، نتايج آزمون PCR كاملا مطابقت داشت با نتايج سازمان انتقال خون كاشان پس از انجام آزمون هاي تاييدي. آزمون طراحي شده، فاقد نتايج مثبت كاذب بود كه علاوه بر جلوگيري از حذف داوطلبين سالم اهداء خون، در كاهش هزينه هاي سازمان هم مي تواند نقش بسزايي داشته باشد. بنابراين به نظر مي رسد بتوان آن را جايگزين روش جاري غربالگري اين ويروس نمود كه اولا هزينه ي انجام آن بسيار پايين تر مي باشد و ثانيا بخشي از واجدين شرايط، از اهداء خون منع نمي گردند.

Hepatitis B virus (HBV) is of common viruses that transmitted by blood and blood products. The aim of this study is to design a polymerase chain reaction-based test to detect HBV in clinical samples. In this study, one blood sample with known load of HBV is prepared to assess the ability of designed primer pair. The specificity of the primer pair was somewhat confirmed by testing against three common virus types, in addition to bioinformatics analysis. The test was also used to screen applicants of blood transfusion organization of Kashan and its results compared with results of a current method used by this organization. The results of this study showed that the designed primer pair specifically amplifies the HBV genome and its sensitivity is 100 particle per ml of blood, which is more sensitive than the results of the ELISA method currently used in blood transfusion organization. In clinical samples, however, the results of the polymerase chain reaction (PCR) test were completely in accordant with the results obtained by blood transfusion organization after confirmatory tests. The designed test has no false positive results in contrast to ELISA, which, in addition to preventing the exclusion of healthy volunteer blood donors, could also have a significant role in reducing costs of the organization. So, it seems that it can replace the current screening method of this virus, that firstly the cost of doing it is much lower and secondly a part of bona fide person are not prevented from donating blood.