جهش هاي ژن gyrA در جدايه هاي سودوموناس آئروزينوزا مقاوم به فلوروكوئينولون ها در استان گيلان

Mutations of GyrA Gene in Fluoroquinolone Resistant Isolates of Pseudomonas aeruginosa in Guilan Province

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژينوزا يك پاتوژن مهم فرصت طلب در افراد مبتلا به بيماري تنفسي مزمن يا افراد با نقص ايمني است. اين باكتري مقاومت ذاتي و اكتسابي به انواع آنتي بيوتيك ها را نشان مي دهد. يك مكانيسم مهم مقاومت به فلوروكوئينولون ها در سودوموناس آئروژينوزا جهش در gyrA، يك زيرواحد توپوايزومراز نوع II مي باشد. هدف از اين مطالعه بررسي جهش هاي ژن gyrA در جدايه هاي مقاوم به دارو در استان گيلان بود. مواد و روش ها: در اين مطالعه مقطعي، 44 جدايه سودوموناس آئروژينوزا جدا شده از نمونه هاي مختلف از جمله سوختگي، ادرار و ترشحات تنفسي به كمك روش هاي بيوشيميايي تعيين هويت شدند. حساسيت و مقاومت به آنتي بيوتيك به روش كربي بور تعيين گرديد. از آزمون χ2 بهره برده شد و براي معني دار بودن نتايج 0/05> P لحاظ شد. براي بررسي جهش هاي ژن gyrA در جدايه هاي مقاوم به سيپروفلوكساسين، PCR- سكونسينگ انجام شد. نرم افزار CLCmain workbench v3.5 و نرم افزار بلاست (BLAST) براي مقايسه توالي ژن gyrA در جدايه هاي مقاوم با ژن رفرنس در PAO1 مورد استفاده قرار گرفتند. يافته ها: بالاترين ميزان مقاومت به سيپروفلوكساسين در جدايه ها MIC>512 µg/ml بود. دو جهش T83I و D87Y در ژن gyrA در جدايه هاي مقاوم شناسايي شد. هم چنين اين مطالعه نشان داد كه بين ميزان MIC در جدايه هاي مقاوم به سيپروفلوكساسين و جهش در ژن gyrA ارتباطي وجود ندارد. استنتاج: اين نتايج نشان مي دهد كه جهش در ژن gyrA يكي از مهم ترين مكانيسم هاي مقاومت به سيپروفلوكساسين در جدايه هاي كلينيكي سودوموناس آئروژينوزا در گيلان بوده و به نظر مي رسد جهش در gyrAبه همراه چند ژن درگير در ايجاد مقاومت، باعث افزايش مقاومت در جدايه هاي مختلف شده باشد.

Background and purpose: Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen in patients with chronic respiratory disease or in immunocompromised hosts. This bacterium shows intrinsic and acquired resistance to diverse antimicrobial agents. An important mechanism of resistance to fluoroquinolones in P. aeruginosa is the mutation in gyrA, a subunit of topoisomerases II. The aim of this study was to investigate the gyrA mutations in ciprofloxacin resistant isolates in Guilan province. Materials and methods: In this cross-sectional study, 44 P. aeruginosa strains were isolated from different clinical samples such as burn, urine and respiratory secretions identified by biochemical tests. The antibiotic resistance and susceptibility of strains was determined by Kirby Bauer method. Chisquare test was carried out and P value of < 0.05 was considered statistically significant. PCR-sequencing was carried out to assess the gyrA mutations in drug resistant isolates. CLC main workbench v3.5 and BLAST softwares was used to compare gyrA sequence in resistant isolates with reference gene in PAO1. Results: The highest MIC of ciprofloxacin in some strains was >512 μg/ml. T83I and D87Y mutations were determined in gyrA gene in resistance isolates. Also, this study showed no relationship between MIC of ciprofloxacin in resistant isolates and mutation in gyrA. Conclusion: These results demonstrated that gyrA mutations are one of the most important mechanisms of resistance to ciprofloxacin in clinical strains of P. aeruginosa in Guilan. It is believed that mutations in gyrA alongside several genes that are involved in development of resistance have increased the resistance in different strains.