بهبود تمايز نوروگليال از سلول هاي بنيادي پالپ دندان انساني توسط مايع مغزي-نخاعي

Improvement of Neuroglial Differentiation from Human Dental Pulp Stem Cells Using CSF

سابقه و هدف: مايع مغزي- نخاعي (CSF) داراي طيف وسيعي از مولكول هاي ضروري در فرآيند نوروژنزيس است. سلول هاي بنيادي پالپ دندان انساني (hDPSCs) كه از سلول هاي ستيغ عصبي مشتق شده اند، مي توانند در حضور فاكتورهاي نوروتروفيك مناسب به سلول هاي گليال و نورون تمايز يابند. هدف از اين مطالعه القاي تمايز hDPSCs به سلول هاي نوروگليال با استفاده از اسيد رتينوئيك و CSF است. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، hDPSCs از دندان مولار سوم انساني به روش مكانيكي- آنزيمي جدا و كشت داده شدند. 105 × 2 سلول به هر يك از چاهك هاي پليت 6 خانه اي منتقل و با اسيدرتينوئيك (گروه 1، گروه RA) و CSF (گروه 2، گروه CSF) به مدت 8 روز القاء شدند. هم چنين به مدت 4 روز توسط اسيد رتينوئيك و 4 روز توسط CSF (گروه 3، گروه RC) تيمار شدند. ايمنوسيتوشيمي Nestin، βIII-tubulin و GFAP جهت ارزيابي استفاده شدند. طول آكسون سلول ها به روش نيترات نقره بررسي و اجسام نيسل با كريزل ويوله رنگ آميزي شد. محاسبات آماري توسط نرم افزار SPSS 16 و با آزمون هاي آماري One-way ANOVA و Chi Square انجام گرفت. يافته ها: مورفولوژي سلول هاي تمايز يافته به طور مشخص در گروه هاي تمايزي بعد از روز 5-3 تغيير يافت. نتايج ايمنوسيتوشيمي نشان داد كه Nestin در همه گروه ها بيان شد. هم چنين بيش ترين درصد سلول هاي بيان كننده Nestin و βIII-tubulin به ترتيب در مراحل پيش القايي و القايي مشاهده شدند. اجسام نيسل به صورت ذرات توپر بنفش رنگ در سيتوپلاسم سلول هاي تمايز يافته شناسايي شدند. استنتاج: يافته ها نشان مي دهد كه مي توان از اسيد رتينوئيك به عنوان پيش القاگر و CSF به عنوان القاگر جهت تمايز در شرايط آزمايشگاهي hDPSCs به سلول هاي نوروگليال استفاده كرد.

Background and purpose: Cerebrospinal fluid (CSF) has a broad set of molecules which is essential for neurogenesis. Human dental pulp stem cells (hDPSCs) are putatively neural crest cell-derived that can differentiate into neurons and glial cells under appropriate neurotrophic factors. The aim of this study was to induce differentiation of hDPSCs into neuroglial phenotypes using Retinoic acid (RA) and CSF. Materials and methods: The hDPSCs were isolated by mechanical enzymatic digestion from an impacted third molar and cultured. 2 × 105 cells were treated by 10-7 μM Retinoic acid (RA group) for 8 days, CSF (CSF group) for 8 days and pre-induced with RA for 4 days followed by inducing with CSF for 4 days (RC group). Nestin, βIII-tubulin and GFAP immunostaining were used for evaluating the differentiated cells. Axonal outgrowth was detected using Bielschowsky's silver impregnation method and Nissl bodies were stained in differentiated cells by Cresyl violet. Data analysis was performed in SPSS V.16 applying One-way ANOVA and Chi-square test. Results: The morphology of differentiated cells in treated groups significantly changed after 3-5 days. The immunocytochemistry results showed that nestin, the neuroprogenitor marker, was observed in all groups. Whereas, a high percentage of nestin positive cells and ΒIII-tubulin, as mature neural markers, were seen at the pre-induction and induction stage, respectively. Nissl bodies were detected as dark-blue particles in the cytoplasm of treated cells. Conclusion: The findings suggest that the RA as pre-inducer and CSF as inducer could be used for in vitro differentiation of neuroglial cells from hDPSCs.