بررسي توزيع فراواني ويروس HPV18 از طريق حضور ژن انكوپروتئين E6 در نمونه بيماران مبتلا به سرطان سرويكس

Frequency distribution of HPV18 based on the detection of E6 oncoprotein gene in cervix cancer samples

سابقه و هدف: آلوده شدن با انواع پر خطر پاپيلوما ويروس فاكتور مهمي در بروز سرطان سرويكس مي­باشد. از آنجا كه كشت سلولي و روش ­هاي سرولوژيك در شناسايي اين ويروس و انواع آن فاقد ارزش هستند، اهميت روش ­ هاي مولكولي در تشخيص قطعي و زودرس اين ويروس آشكار مي­ گردد. هدف از مطالعه، بررسي فراواني ويروس HPV18 از طريق ژن E6 از نمونه­ هاي بلوك پارافيني با استفاده از روش PCR مي ­باشد. مواد و روش ­ها: از بين 150 بلوك پارافيني از ضايعات پيش سرطاني و سرطاني دهانه رحم تهيه شده طي سال­هاي 1385 تا 1390 تعداد 69 نمونه انتخاب شد و چك ليستي از آنها تكميل گرديد. سپس، استخراج DNA از بلوك هاي پارافينه با روش فنل/كلروفرم انجام گرفت. جهت بررسي HPV عمومي و HPV-18 به ­ترتيب از پرايمرهاي ژن­ هاي L1 و E6 استفاده گرديد. نتايج: از ميان 69 بيمار مبتلا به سرطان دهانه رحم، 53 مورد (76/8 درصد) از نظر HPV مثبت و 16 مورد (23/19 درصد) منفي بودند. از اين تعداد مثبت 12 مورد (17/39 درصد) HPV18 مثبت بود. 6 بيمار داراي تشخيص Cervical Intraepithelial Neoplasia II، III (CIN II، III) و 6 بيمار داراي تشخيص Squamous Cell Carcinoma (SCC) بودند. نتيجه ­گيري: يافته­ هاي حاصل از مطالعه ما نتايج مطالعات قبلي مبني بر ارتباط ميان HPV و سرطان دهانه رحم را تقويت مي­ كند. با توجه به پروتكل به­ كار رفته در استخراج DNA و PCR ، مي ­توان به­ صورت معمول اين تست را در آزمايشگاه پاتولوژي با امكانات ساده و ارزان انجام داد.

Background: Persistent infection with high-risk human papillomavirus (HPV) is one of the most important risk factors for developing cervix cancer. Since cell culture and serological methods have no diagnostic value for the detection of this virus and its variants, the importance of molecular methods such as PCR in the early and definite diagnosis of such virus becomes evident. This study aimed to evaluate the frequency of HPV18 based on detecting E6 gene in paraffin block samples using the PCR method. Materials and Methods: In this study, 69 out of 150 cervix samples of precancerous and cancerous lesions were collected during 2007-2012. DNA was extracted from paraffin blocks using the phenol/chloroform method. Two L1 and E6 consensus primers were used to evaluate the HPV and 18 HPV, respectively. Results: Among 69 patients with cervix cancer, 53 (76.8%) cases were HPV-positive and 16 (23.19%) HPV-negative. Twelve out of 53 (17.39%) HPV-positive cases were HPV18- positive. Moreover, 6 cases were diagnosed with cervical intraepithelial neoplasia II, III and 6 with squamous cell carcinoma. Conclusion: Results of the study confirm the previous reports concerning the relationship between HPV and cervix cancer. Considering the efficiency of DNA extraction and PCR protocol, we can use the test in pathology labs with simple and inexpensive facilities.