جداسازي و شناسايي باكتري هاي مصرف كننده اسيدلاكتيك از شكمبه گاو و اثر آنها در كنترل اسيدوز در شرايط آزمايشگاهي

Isolation and Identification of Lactic Acid Utilizing Bacteria from Cow Rumen and Their Effect on the Control of Acidosis in Vitro

هدف مطالعه جداسازي و شناسايي باكتريهاي مصرف كننده اسيدلاكتيك و بررسي پتانسيل آنها در كنترل اسيدوز شكمبه اي در شرايط آزمايشگاهي بود. مايع شكمبه از سه راس گاو هلشتاين جمع آوري گرديد و جداسازي باكتري با استفاده از محيط كشت اختصاصي صورت گرفت. خصوصيات جدايه ها بر اساس شكل و رنگ آميزي گرم، توليد ايندول، فعاليت كاتالازي و تخمير برخي قندها بررسي شد. شناسايي جدايه ها با استفاده از توالي يابي نوكلئوتيدي انجام گرفت. نتايج توالي يابي نشان داد كه جدايه‌ها بيشترين خويشاوندي را با مگاسفرا السدنيDSM20460 داشتند. در مرحله بعد اثر جدايه ها بر كاهش اسيدلاكتيك و كنترلpH در شرايط آزمايشگاهي مورد بررسي قرار گرفت. مقدار يك گرم خوراك سريع التخميرو 10 ميلي ليتر مايع شكمبه درون ويالهاي شيشه اي قرار داده شد و از هر جدايه دو دوز 0/5 و 1 ميلي ليتر به هركدام تلقيح شد. ويالها به مدت 6 ساعت در انكوباتور قرار گرفتند. توليد گاز، pH و اسيدلاكتيك هر نمونه اندازه گيري شد. استفاده از باكتري، غلظت اسيدلاكتيك را كاهش و توليدگاز و pH را افزايش داد (0/0001>p). نتايج نشان داد باكتريهاي مصرف كننده اسيدلاكتيك، پتانسيل كنترل اسيدوز شكمبه اي را دارند.

The aim of this study was the isolation and identification of lactic acid utilizing bacteria and evaluation of their potential to control ruminal acidosis in vitro. Rumen fluid was collected from three Holstein cow and Isolation was performed using aspecific medium. Characterization of isolates was evaluated based on the shape and gram staining, indole production, catalase activity and fermentation of some sugars. Identification of isolates was done using the nucleotide sequencing. The results of sequencing showed that the isolates had the most similarity with Megasphaera elsdenii DSM20460. In the next step, effect of isolates on reduction of lactic acid and control of pH was examined. One gram of easily fermentable feed and 10 ml rumen fluid added to glass vials and inoculated with two doses of each isolate (5.0 and 1 ml) then, incubated for 6h. Gas production, pH and lactic acid for each sample were measured. Use of bacteria decreased lactic acid concentration and increased gas production and pH (p<0.0001). The results showed lactic acid utilizing bacteria has potential to control of rumianal acidosis.