بررسي ضرورت پوشانيدن گل ها در گرده افشاني كنترل شده سيب با رديابي آلل هاي ريزماهواره در نتاج تلاقي ارقام گلدن ’ اسموتي ‘ ×شفيع آبادي

Necessity of Covering in Controlled Pollination of Apple by Detection ofMicrosatellite Alleles in Offspring of ‘Golden Smoothee’×’Shafi Abadi’

براي بررسي توارث آلل هاي مكان هاي ريز ماهواره و ضرورت استفاده از پوشش براي گرده افشاني كنترل شده در سيب، دورگه هاي حاصل از تلاقي ارقام سيب «گلدن اسموتي» × «شفيع آبادي» كه حاصل دو روش استفاده و عدم استفاده از پوشش بعد از گرده افشاني كنترل شده بودند، مورد استفاده قرار گرفت. از تعداد 60 دانهال (30 مورد براي هر روش گرده افشاني) به همر اه والدين و ارقامي كه به عنوان منابع احتمالي دانه گرده مطرح بودند، DNA استخراج شد. چهار نشانگر ريز ماهواره (شامل CH0.3d12، CH03d07، CH04a12 و CH03c07) چند شكل بين والدين گزينش شده و آغازگرهاي فلورسنت ويژه آنها تهيه شد. قطعه هاي DNA به روش واكنش زنجيره اي پليمراز با آغازگرهاي فلورسنت نشان دار شده با رنگهاي مختلف تكثير شدند و با استفاده از يك توالي ياب اتوماتيك ABI 377 و نرم افزار ژن اسكن نسخه 2 و بر اساس استاندارد دروني، اندازه باندها تعيين شد. نتايج نشان داد كه تمام دانهال ها هر يك از آلل هاي خود را در هر مكان ريزماهواره از يكي از والد ين به ارث برده اند و دو روش استفاده و عدم استفاده از پوشش از نظر گرده افشاني با منبع گرده ناخواسته، هيچ گونه تفاوتي با همديگر نداشتند و در بين دانهال هاي مورد بررسي هيچ دانهال حاصل از گرده ناخواسته ديده نشد. توزيع آلل هاي ريز ماهواره در هر مكان نشان داد كه توارث آنها به صورت هم بارز بوده و با توجه به آزمون كاي اسكور اختلاف معني داري با نسبت هاي مندلي 1:1:1:1 و 1:0 نداشتند. اين نتايج نشان داد كه حداقل در موارد با حساسيت كمتر مثل اصلاح رقم كه مستلزم گرده افشاني كنترل شده تعداد زيادي گل در زماني محدود است، ضرورتي براي استفاده از پوشش وجود ندارد. اين نتايج همچنين كارايي ريزماهواره ها را در تعيين روابط والد - نتاج جمعيت ها براي استفاده در مطالعاتي نظير توارث پذيري صفات و آلل ها، تجزيه جمعيت هاي در حال تفرق، تهيه نقشه هاي ژنتيكي و پيوستگي و بازيابي شجره تاريخي درختان ميوه نشان داد.

A population of offspring from a cross between ‘Golden Smoothee’ × ‘Shafi Abadi’ apple which was developed by two methods of controlled pollination (with and without covering after controlled pollination) was used to investigate the inheritance of microsatellite alleles and the necessity of covering in controlled pollination of apple. DNA was extracted from 60 seedlings (30 from each method) as well as corresponding parents and the probable source of unwanted pollen. Four microsatellite loci (CH03d12, CH03d07, CH04a12 and CH03c07) which were polymorphic among parents were selected and their florescent primers were prepared. DNA amplification was carried out using different colored florescent primers, and alleles size were determined using ABI377 automatic gene sequencer and Gene Scan Software version 2.0 according to internal standards. Results showed that all seedlings shared one allele at each locus with each parent indicating their hybrid and true to type nature. There were no differences between two methods of controlled pollination in terms of unwanted pollination and there were no off type seedling originating from unwanted pollen source. Allele distribution among the progenies showed their co-dominant mode of inheritance, and no significant difference with Mendelian co-dominant ratio (1:1:1:1) was observed using chi square (x2) test. These results showed that there was no need for covering after controlled pollination of apple at least for less sensitive cases such as cultivar breeding which takes lots of time and cost for controlled pollination of many flowers in a limited time span. Results also showed the importance and potential of microsatellite loci in detecting parent-offspring relationship prior to inheritance study of characters and alleles, bulk segregation analysis, gene and linkage map and historical reconstruction of fruit tree pedigree.