پتانسيل تمايز شبه عصبي حركتي سلول هاي بنيادي خون ساز CD133+ و CD34+ مشتق از خون بند ناف انسان؛ در شرايط آزمايشگاه

Differentiation potential of human CD133 and CD34 positive hematopoietic stem cells into motor neuron- like cells; an in vitro study

سابقه و هدف: در اين مطالعه، تمايز سلول هاي بنيادي خون ساز CD133+ و CD34+ مشتق از خون بند ناف انسان، به سلول هاي شبه عصبي حركتي، بررسي شد. روش بررسي: سلول هاي بنيادي خون ساز از خون بند ناف انسان جدا شده و سپس، سلول هاي +CD133 و +CD34 براساس ماركر، توسط تكنيك جداسازي مغناطيسي MACS تفكيك شدند. بررسي فلوسايتومتري، براي تعيين درصد خلوص سلول هاي جداشده، انجام گرفت. پس از آن، سلول ها در محيط كشت داراي سرم و حاوي فاكتورهاي RA، Shh، BDNF و B27 كشت داده شدند و در انتها بيان پروتئين هاي عصبي حركتي AChE، ISL-1، NF-H و Nestin توسط ايمونوسيتوشيمي و فلوسايتومتري بررسي شد. يافته ها: آناليز فلوسايتومتري ماركر هاي سطحي نشان دهنده 98درصد سلول هاي CD133+ و 95/7 درصد سلول هاي CD34+ جداشده بود. تغيير شكل سلول ها، به صورت ايجاد زوائد آكسون مانند، پس از دوره تمايزي و بيان پروتئين هاي عصبي حركتي با ايمونوسيتوشيمي مشاهده شد و نتايج حاصل از فلوسايتومتري پس از دوره تمايزي بيان ) ISL-%66/4)، AChE (%58/3)، NF-H (%80/6)، Nestin (%84/9) را در سلول هاي CD133+ و همچنين بيان ISL-1(63/2%)، AChE (52/3%)، NF-H (78/6%) و Nestin (80/1%) را در سلول هاي CD34+ تاييد كرد. نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه سلول هاي بنيادي خون ساز CD133+ و CD34+ خون بند ناف انسان قابليت تمايز به سلول هاي شبه عصبي حركتي را در شرايط آزمايشگاه دارند والبته مطالعات بيشتر جهت بررسي عملكرد سلول هاي شبه عصبي حركتي حاصل از اين تمايز در بدن موجود زنده پيشنهاد مي شود

Background: We were studied on differentiation potential of CD133+ and CD34+ hematopoietic stem cells into motor neuron like cells. Materials and methods: CD133+ and CD34+ HSCs were isolated from human UCB using MACS system. After cell characterization using flow cytometry, the cells were treated with a combination of Retinoic acid, Sonic hedgehog, Brain derived neurotrophic factor, and B27 through a 2- step procedure for two weeks. The expression of MN-specific markers was examined using immunocytochemistry and flow cytometery. Results: Flow cytometery analysis revealed 98% and 95.7% CD133+ and CD34+ cells, respectively. By the end of the two-week differentiation protocol, CD133+ and CD34+ cells acquired unipolar MNL morphology with thin and long neurites. The expression of Isl-1, AChE, NF-H and Nestin was detected in 66.4%, 58.3%, 80.6%and 84.9% of CD133+ cells and 63.2%, 52.3%, 78.6% and 80.1% of CD34+ cells. T Conclusion: Human UCB - CD133+ and CD34+HSCs are remarkably potent cell candidates to trans- differentiate into motor neuron-like cells, in vitro.