بهينه سازي ترسيب توكسوئيد ديفتري به‌منظور ارتقاء واكسن به‌وسيله آمونيوم-سولفات فوق اشباع

OPTIMIZATION OF DIPHTHERIA TOXOID PRECIPITATION BY USING SATURATED AMMONIUM SULPHATE IN ORDER TO IMPROVE DIPHTHERIA VACCINE

سابقه و هدف: كورينه باكتريوم ديفتريه باكتري هوازي و بي­ هوازي اختياري است. مهم­ترين گونه از خانواده كورينه ‌باكترياها، عامل بيماري ديفتري است كه به ­وسيله توكسين خود، بيماري ديفتري را ايجاد مي­كند. آمونيم ­سولفات نمكي معدني است كه از آن براي ترسيب و خالص­سازي پروتئين ها استفاده مي­شود كه با افزايش مقدار نمك حلاليت پروتئيني كم شده و پروتئين ­ها به­ واسطه قطعه­ هاي هيدروفوب خود، به­هم پيوسته و رسوب مي­كنند. واكسن ديفتري از طريق تخليص و ترسيب توكسوئيد باكتري ديفتري تهيه مي­ شود كه از جمله روش­هاي ترسيب، استفاده از آمونيوم ­سولفات به­صورت نمك خشك و يا تهيه محلول فوق اشباع از آن است. مواد و روش ­ها: كشت باكتري ديفتري در شرايط بهينه و مغذي سبب افزايش توليد توكسين توسط باكتري مي­شود و بعد از غيرفعال­ سازي توكسين و تبديل آن به توكسوئيد در صنايع توليد واكسن مورد استفاده قرار مي­گيرد. كليه محيط­هاي كشت بايد حداقل به ­مدت 24 ساعت در حرارت 37-35 درجه سانتي­گراد انكوبه شوند. به ­منظور ترسيب توكسوئيد باكتري از محلول فوق اشباع 4/32 مولار آمونيوم با درصدهاي مختلف سولفات استفاده شد. نتايج به ­دست آمده از اين روش باSDS PAGE و (Lateral flow test) Lf TEST مورد بررسي قرار گرفت. يافته­ ها: استفاده از آمونيوم­سولفات فوق اشباع4/32 مولار به­ جاي استفاده از نمك خشك آمونيوم­سولفات كه در روش سنتي (WHO TRS, No.980) كه قبل در صنايع واكسن ­سازي مورد استفاده قرار مي­گرفت، باعث حذف مرحله طولاني مدت دياليز شده و از طرفي هدر رفت محصول نهايي (توكسوئيد) را به ­صورت كامل محسوس كاهش داده و هم­چنين باعث حذف ناخالصي ­هاي ناخواسته از محصول نهايي شده و محصول نهايي خالص ­تر را در مقياس بيش­تر در اختيار قرار داده است. نتيجه ­گيري: از آنجايي­كه هدف در صنايع توليد واكسن، دست­يابي به مقدار حداكثري توكسوئيد از اين باكتري است لذا استفاده از آمونيوم­ سولفات فوق اشباع 4/32 مولار براي ترسيب توكسوئيد ديفتري به­ جاي استفاده از نمك خشك آمونيوم ­سولفات باعث كاهش هدر رفت محصول نهايي و حذف مرحله زمان بر و غير اقتصادي دياليز شده و از نظر اقتصادي نيز مقرون به صرفه­ تر خواهد بود.

Aim and Background: Diphtheria toxin is an extracellular protein of Corynebacterium diphtheria that inhibits protein synthesis and kills susceptible cells. Ammonium sulfate is an inorganic salt that is used to purify and precipitate proteins, which, by increasing salt content, decreases the solubility of proteins, and proteins interconnect and precipitate through their hydrophobic parts. Diphtheria vaccine is prepared by purifying and treating toxoid diphtheria bacteria, which is one of the methods of treating, using ammonium sulfate as a dry salt or preparing an over-saturated solution. Material and Methods: Diphtheria bacteria grown in optimal conditions and increased nutrient and toxin production by bacteria and inactivating the toxin into toxoid, in the manufacture of the vaccine is use. All media must be at least 24 hours at a temperature of 37-35°C will be incubated. In order to bacterial toxoid deposition of supersaturated solution 4.32 M ammonium sulfate with different percentages were used. The results of this procedure were investigated using SDS PAGE and Lf TEST ( Lateral Flow Test). Results: Results revealed the use of 4.32 M supersaturated ammonium sulfate instead of the use of dry salt of ammonium sulfate, used in the traditional method (WHO TRS, No. 980), used previously in the vaccine industry, Eliminating the long-term dialysis phase On the other hand, the final product (toxoid) has been tediously reduced It also removes unwanted impurities from the finished product and has made the net product even more scalable. Conclusion: Since the purpose of vaccine production is industry to achieve maximum toxoid of the bacteria, so use the procedure in this research project (optimizing of DT toxin precipitation by 4.32 M super saturation of ammonium sulphate) , in addition to reducing the loss of the final product and remove the prolonged dialysis stage and so the economy will become more affordable.