بيان ژن recA درموتانdinI مقاوم به سيپروفلوكسازين اشريشيا كلي

recA gene expression in ciprofloxacin resistant Escherichia coli dinI- mutant

مقدمه: در پاسخ به توسعه داروها، ريزموجودات با سازوكارهاي متنوعي به آنها مقاوم مي‌شوند. در سال‌هاي اخير، شيوع مقاومت به فلوروكينولون‌ها مانند سيپروفلوكساسين در اشريشيا كلي به‌طور چشمگيري افزايش يافته است. موتان‌زايي ناشي از SOS، مقاومت به فلوروكينولون‌ها را القا مي‌كند. ژن dinI، عضو تنظيمي پاسخ SOS است و پروتئين DinI را كد مي‌كند كه تعديل‌كننده مثبت و منفي عملكرد RecA است. در بررسي‌هاي پيشين مشخص شده است كه با بيان ژن recA در موتان‌هاي dinI+ اشريشيا كلي،مقاوم به سيپروفلوكساسين افزايش مي‌يابد. هدف پژوهش حاضر، بررسي بيان ژن recA در موتان -dinI مقاوم به سيپروفلوكساسين است. مواد و روشها: موتان باكتريايي -dinI در معرض غلظت‌هاي افزايشي سيپروفلوكساسين به روش پلكاني مقاوم و MIC تعيين شد. سپس بيان ژن recA در سويه تيپ وحشي و موتان‌هاي مقاوم -dinI و +dinI با روش Real time PCR بررسي شد. نتايج: نتايج نشان دادند كه مقاومت سويه -dinI به سيپروفلوكساسين كم و MIC آن 3/0 ميكروگرم در ميلي‌ليتر است. ميزان بيان ژن recA در موتان-dinI مقاوم به سيپروفلوكساسين نسبت به سويه تيپ وحشي افزايش يافت، هرچند ميزان افزايش بيان حدود يك‌چهارم سويه +dinI بود. بحث و نتيجه گيري: غيرفعال‌سازي dinI مانع افزايش بيان ژن recA نمي‌شود و تنظيم فعاليت RecA احتمالاً پيچيده است و در نبود dinI، توسط پروتئين‌هاي تنظيمي ديگر انجام شود.

Introduction: Microorganisms in response to drug development, acquire resistance through a variety of mechanisms. The prevalence of resistance to fluoroquinolones (FQ), such as ciprofluxacin in Escherichia coli has increased markedly in recent years. Mutagenesis induced by SOS catalyzes the evolution of resistance to fluoroquinolones. A member of the SOS regulon is the dinI gene. Protein encoded by the gene DinI acts as positive and negative modulator of RecA performance. Previous studies showed recA gene expression in ciprofloxacin resistant Escherichia coli dinI+ in which mutants increased. The aim of this study was to investigate recA gene expression in dinI- mutant resistant to ciprofloxacin Materials and Methods: For this purpose, dinI- mutant became ciprofloxacin resistant by encountering to increase amount of ciprofloxacin via stepwise method and be evaluated for MIC. Then, the expression of recA gene was determined in wild type, dinI- and a dinI+ mutants by real time PCR. Results: The results showed that a dinI- mutant acquired low level of resistance to ciprofloxacin and its MIC was 0.3 μg/ml. recA gene expression in the dinI- mutant was increased in comparison with wild type strain. However, the amount of increase was about one fourth of increase in dinI+ mutant. Discussion and conclusion: In conclusion, inactivation of dinI gene does not inhibit increase in recA gene expression and regulation of RecA activity is possibly complex and could be conducted in the absence of dinI by other regulatory proteins.