روش‌هاي جداسازي توالي‌هاي مجاور يك قطعه شناخته شده در فرآيند مهندسي ژنتيك

Methods to Isolate DNA Sequences Flanking a Known DNA Segment in Genetic Engineering

كشت بيش از 170/3 ميليون هكتار محصول تراريخته در بيش از 28 كشور جهان و مصرف محصولات تراريخته در صدها كشور مانع از استمرار مخالفت برخي از گروه‌هاي به ظاهر طرفدار محيط زيست يا سلامت انسان نشده است. يكي از ملاحظه‌هاي ابراز شده از سوي اين گروه‌ها احتمال وقوع اثرهاي ناخواسته در نتيجه ورود تراژن در ناحيه‌اي از ژنوم ميزبان است كه ممكن است داراي نقشي حياتي در كيفيت محصول باشد. براي ارزيابي نتيجه حاصل از ورود تراژن اطلاع از رديف پيراموني محل تلفيق تراژن مي‌تواند مفيد واقع شود. اگرچه تعيين رديف ناحيه مجاور محل تلفيق تراژن جزيي الزامي از مراحل تجزيه ريسك در ايمني زيستي محسوب نمي‌شود اما توليد كنندگان محصولات تراريخته و پژوهشگران اين عرصه به صورت داوطلبانه و براي ايجاد اطمينان هرچه بيشتر در مصرف كنندگان اين كار را انجام مي‌دهند. روش‌هاي مختلفي براي تعيين رديف پيرامون محل تلفيق تراژن پيشنهاد شده است كه هركدام داراي برتري‌ها و پيچيدگي‌هاي ويژه خود است. اين مقاله اين روش‌ها را مورد مرور و تجزيه و تحليل قرار مي‌دهد. اين روش‌ها شامل روش‌هاي مبتني بر همسانه‌سازي و روش‌هاي مبتني بر پي.سي.آر هستند. همسانه‌سازي با وجود دقت بالا، به دليل صرف زمان و هزينه زياد، كمتر مورد استفاده قرار گرفته است در مقابل روش‌هاي مبتني بر پي.سي.آر سريع و كم‌هزينه بوده و در سال‌هاي اخير تعداد زيادي از اين روش‌ها توسعه يافته‌اند كه در سه گروه كلي پي.سي.آر معكوس، روش‌هاي مبتني بر سازگارساز و روش‌هاي مبتني بر آغازگر قرار مي‌گيرند.

Cultivating more than 170.3 million hectares of GM products in more than 28 countries and consumption of GM products in hundreds of countries, do not block opposition of some apparently environmentalist or Human health groups. One of the concerns expressed by these groups is probability of unintended effects due to insertion of transgene in a region of host genome which may be critical to the quality of the product. Toevaluate theresult ofinsertionof a transgene into the genomeknowing the sequence surrounding the integrationsitecan be useful. Althoughthe Identification of DNA sequences flanking transgene insertions site is not consider as a necessary steps of biosafetyriskassessment, butGM productsmanufacturersandresearchers in thisfield do this analysis voluntary and to create more confidence in consumers. Various methodshave been proposedto determination of DNA sequences adjacent to transgene, each method has advantages and special complexities.This paper review and analysis the procedures. These techniquesincludemethodsbased cloning andPCR. Cloning despite high accuracy, less has been used due to time-consuming. In contrast, PCR-based methods are rapid and cheap and a large number of these methods have been developed in recent years,which are divided into three main groups: inverse PCR, ligation/adaptor mediated PCR and primer-based methods.