كلونينگ و بيان ژن كد كننده راپتري سيزده (ROP13) سويه RH توكسوپلاسما گونديي

Cloning and Expression of Toxoplasma gondii Rhoptry13 Gene in pcDNA3 Plasmid

سابقه و هدف: توكسوپلاسما گونديي انگل تك ياخته درون سلولي اجباري مي‌باشد. با توجه به شيوع بالاي توكسوپلاسموزيس و اهميت وافر اين بيماري در بهداشت عمومي، دستيابي به واكسن موثر و روش هاي تشخيصي حساس براي اين بيماري، بيش از پيش حائز اهميت است. هدف از اين بررسي، شناسايي و كلون كردن ژن كدكننده پروتئين ROP13 سويه RH انگل توكسوپلاسما گونديي و بيان آن در سلول يوكاريوتيك CHO بود. مواد و روش‌ها: در اين تحقيق، ژن ROP13پس از تكثير با روش PCR، در پلاسميد انتقالي pTG19-Tكلون و پس از آن در سوش TOP10 باكتري E.coli ترانسفورم شد. سپس ساب كلونينگ ژن ROP13 در پلاسميد بياني pcDNA3 انجام شد. هم چنين پلاسميد pcROP13 در سلول يوكاريوتي CHO ترانسفكت شد و به منظور بررسي بيان ژن نوتركيب از روش IFA استفاده شد. يافته‌ها: با استفاده از روش هاي PCR، تعيين توالي و روش هضم آنزيمي، كلونينگ ژن ROP13 در پلاسميدهاي بياني و انتقالي تاييد شد. نتايج تعيين توالي ژن كدكننده ROP13 با سويه RH ثبت شده در بانك جهاني ژن تشابه كامل داشت. هم چنين با استفاده از روش IFA، بيان ژن ROP13 در سلول يوكاريوتيك CHO مورد تاييد قرار گرفت. استنتاج: نتايج نشان داد كه كلونينگ و ترانسفورم قطعه ROP13 در پلاسميد pcDNA3با موفقيت انجام شده و در سلول يوكاريوتCHO بيان مي شود. لذا از اين پلاسميد نوتركيب مي توان در مطالعات آتي به منظور واكسيناسيون و تشخيص عفونت مي توان بهره برد.

Background and purpose: Toxoplasma gondii (T. gondii) is an obligatory intracellular protozoan parasite. Toxoplasmosis is highly prevalent and has a great effect on public health, therefor, there is a need for vaccine and sensitive diagnostic procedures. This study aimed at cloning and investigating the expression of ROP13 gene of T. gondii. Materials and methods: In this study, the gene was cloned in pTG19-T vector and transferred to a TOP10 strain of E.coli following ROP13 gene amplification using PCR. Then the ROP13 gene was sub cloned in expression plasmid pcDNA3. Also, pcROP13 was transferred to CHO cells and the expression level was evaluated by IFA method. Results: Cloning and sub cloning of ROP 13 gene were confirmed by PCR, sequencing and enzymatic digestion. The gene sequencing showed complete homology with a recorded sequence in the gene bank. Moreover, the expression of ROP13 gene in CHO eukaryotic cells was confirmed by IFA method. Conclusion: The results showed that ROP13 gene was successfully sub cloned into the pcDNA3 expression vector and expressed in CHO cells. Therefore, it can be used in the development of vaccines and in diagnostic tests.