تعيين برخي ويژگي‌هاي ملكولي و بيولوژيكي توسپو ويروس‌هاي مختلف از استان مركزي

Partial biological and molecular characterization of various tospoviruses from Markazi province

اعضاي جنس Orthotospovirus عوامل مهم خسارت­ زا به انواع محصولات زراعي، سبزيجات و گياهان زينتي در سراسر جهان هستند. به منظور رديابي گونه­ هاي مختلف توسپو ويروس ­ها در استان مركزي، از مزارع و گلخانه­ هاي مختلف كشت گياهان زراعي و زينتي نمونه ­برداري شد. از مجموع حدود 160 نمونه مشكوك با علايم شبه‌ ويروسي جمع ­آوري‌شده، 106 نمونه در آزمون DAS-ELISA، با آنتي­ بادي­ هاي چند همسانه ­اي ويروس ­هاي حلقه زرد گوجه فرنگي (Tomato yellow ring virus, TYRV)، لكه زرد زنبق (Iris yellow spot virus, IYSV) و بافت مردگي جوانه بادام زميني (Groundnut bud necrosis virus, GBNV) واكنش مثبت نشان دادند. بر اساس توالي ­هاي قطعات به دست آمده با استفاده از آغازگرهاي عمومي گروه آسيايي و يوراسيايي توسپو ويروس ­ها و اختصاصي ژن رمز كننده نوكلئوكپسيد در آزمون RT-PCR، وقوع TYRV در گياهان آلسترومريا، توتون، لادن و گوجه فرنگي، IYSV در گياهان پياز و تره و همچنين ويروس سبزرد فلفل (Capsicum chlorosis virus, CaCV) در كوكب كوهي( Rudbeckia sp) تاييد شد. بررسي جدايه­ هاي منتخب با استفاده از سه گونه گياه آزمون Nicotiana benthamiana، Vigna ungoiculata و Capsicum annuum نشان داد كه جدايه ­هاي TYRV از نظر بيولوژيكي از يكديگر متمايز هستند. همچنين ارزيابي­ هاي فيلوژنتيكي بر اساس توالي آمينواسيدي پروتئين نوكلئوكپسيد نشان داد كه جدايه­ هاي TYRV جمع­ آوري شده به زير گروه TYRV-t تعلق داشت و جدايه ­هاي IYSV در زير گروه IYSV-Eurasia گروه ­بندي شدند. جدايه CaCV كوكب كوهي در گروه يك آسيايي (Watermelon silver mottle virus, WsMoV) قرار گرفت و بيشترين قرابت را با جدايه­­ اي از ايالات متحده نشان داد.

Members of the genus Orthotospovirus cause serious diseases in a variety of economically important crops, including ornamentals and vegetables, worldwide. To detect the orthotospoviruses infecting different crops and ornamental plants in Markazi province, Iran, about 160 suspected samples with viral-like symptoms were collected. Totally 106 of the specimens showed positive reaction in DAS-LEISA test using polyclonal antibodies raised against N proteins of Tomato yellow ring virus (TYRV), Iris yellow spot virus (IYSV) and Groundnut bud necrosis virus (GBNV). Sequence analysis of the obtained fragments from RT-PCR using generic primers of Asian and Eurasian clades of tospoviruses and nucleocapsid gene specific primers confirmed the occurrence of TYRV on alstroemeria, tobacco, tomato and nasturtium; IYSV on onion and leek and Capsicum chlorosis virus (CaCV) on black-eyed susan (Rudbeckia sp.). Biological analysis of selected isolates of orthotospoviruses on Nicotiana benthamiana, Capsicum annuum and Vigna unguiculata showed that TYRV isolates were differentiated from each other. Phylogenetic analysis based on amino acid sequences of nucleocapsid protein indicated that TYRV isolates belong to TYRV-t strain and IYSV isolates belong to Eurasia-IYSV cluster. In addition, CaCV isolates were grouped into Watermelon silver mottle virus (WSMoV) clade with close relationship with the United State CaCV isolate.