تعيين تنوع ژنتيكي جدايه هاي Fusarium oxysporum f.sp. ciceri عامل پژمردگي و زردي نخود با استفاده از دو نشانگر RAPD و PCR-RFLP در استان هاي خراسان رضوي و شمالي

Genetic diversity determination of Fusarium oxysporum f.sp. ciceri the causal agent of wilting and chlorosis in chickpea by using RAPD and PCR-RFLP techniques in Razavi and Northern Khorasan provinces

به‌منظور بررسي تنوع ژنتيكي جدايه هاي قارچ عامل پژمردگي و زردي نخود از دو نشانگر مولكولي RAPD و PCR-RFLP استفاده شد. در روش RAPD، 14آغازگر استفاده‌شده، چندشكلي خوبي را نشان دادند. بعد از بررسي الگوهاي باندي اين 14آغازگر، ميزان قرابت ژنتيكي20جدايه بر اساس فاصله ژنتيكي به‌صورت دندروگرام رسم گرديد. تجزيه دندروگرام رپيد نشان داد كه كه بين منشأ جغرافيايي جدايه ها و گروه هاي ژنتيكي، ارتباط معني داري وجود ندارد. در روش PCR-RFLP قطعات تكثيرشده با استفاده از آغازگر هاي IGS2 و CLN12 در يك گروه طولي bp2500 قرار گرفتند. در كل، در اثر هضم محصول PCR با سه آنزيم برشي، 22عدد باند چند شكلي ايجاد شد كه در اين بين، آنزيم RsaI بيشترين تعداد باند چند شكلي (12باند) و آنزيم EcoRI كمترين تعداد باند چند شكلي (3باند) را توليد كردند. نتايج محاسبة فاصلة ژنتيكي آن ها نشان داد كه جدايه هاي FOC86، FOC85 و FOC40 (از نيشابور)، FOC32 (از بجنورد)، FOC21 و FOC15 (از بردسكن) و FOC11 (از قوچان) كمترين فاصله و بيشترين شباهت ژنتيكي را از هم داشته و بيشترين فاصلة ژنتيكي هم بين جداية FOC6 (از قوچان) با ساير جدايه ها به‌دست آمد. در اين روش بين منشأ جغرافيايي جدايه ها با گروه بندي خوشه اي آنها، رابطة آشكاري وجود نداشت.

In order to study the genetic diversity of the causal agent of Fusarium wilting in chickpea, two techniques including RAPD and PCR-RFLP were used. In RAPD-PCR technique, all 14 primers could show the diversity among the isolates. After studding the banding patterns of 14 primers, a dendrogram based on similarity matrix was constructed. The RAPD dendrogram analysis could not separate isolates based on their geographical origins. In PCR-RFLP technique, two primers, IGS2 and CLN12, were used which made the same band pattern (2.5 kb) in all isolates. Totally, 22 polymorphic bands obtained through digestion with three digestive enzymes. The digestive enzyme RsaI produced the highest number of polymorphic bands (12 bands) and EcoRI produced the lowest number (3 bands). The genetic calculation results of the isolates showed that FOC85, FOC86 and FOC40 isolates (from Neyshabour), FOC32 (from Bojnord), FOC21 and FOC15 (from Bardaskan) and FOC11 (from Ghochan) showed the lowest genetic distance and the highest genetic similarity. The most genetic distance observed among FOC6 isolates (from Ghochan) compared to other isolates. Analysis of clusters in this method showed that there are not any specific relation between genotypic grouping and their geographical origins.