روش جدي جستجوي C3d متصل به گلوبول هاي قرمز در جريان فعاليت مكمل

Introducing a new method to detect bound C3d on erythrocytes during complement activation

زمينه: اخيرا اندازه گيري محصولات فعاليت مكمل براي بررسي دقيقتر فعاليت اين سيستم مورد استقبال عمومي قرار گرفته است. هدف: مطالعه به منظور معرفي روش جديد اليزا براي جستجوي گلبول هاي قرمز حاوي محصولات نهايي سيستم مكمل (C3d) به منظور تسهيل بررسي دامنه فعاليت سيستم مكمل و مقايسه آن با C3d آزاد (سرمي) انجام شد. مواد و روش ها: اليزاي غيرمستقيم كه در اندازه گيري رايج C3d آزاد به كار مي رود، به همراه روش جديد اليزا براي بررسي اتصال عناصر مكمل گلبول هاي قرمز مورد استفاده قرار گرفت. ميكروپليت اليزا براي به دام انداختن گلبول هاي قرمز حاوي C3d، با آنتي C3d پوشانده و گلبول هاي قرمز (1×8^10 سلول در ميلي متر) به مدت 2 ساعت به آن اضافه شد. پس از شستشو، سلول هاي قرمز مكمل شده توسط 100 ميكروليتر در آب و ميزان رنگ آنها در طول مدت 405 نانومتر خوانده شد. يافته ها: ميزان C3d آزاد و متصل شده بر روي گلبول هاي قرمز در جريان فعال شده سيستم مكمل به طور چشم گيري در مقايسه با گروه كنترل افزايش يافت (به ترتيب 8 و 5 برابر كنترل). تمام عوامل مكمل مورد بررسي از جمله فاكتور B و پروپردين روي گلبول هاي قرمز قابل جستجو بودند. نتيجه گيري: ميزان C3d آزاد و نيز C3d متصل شده به گلبول هاي قرمز مي تواند منعكس كننده فعاليت جاري سيستم مكمل باشد.

Background: Measurement of complement activation products has recently been the popular means of assessing the complement activation. Objective: To introduce a new method to detect bound C3d on erythrocytes during complement activation and to compare it with free C3d levels. Methods: An indirect ELISA used in routine measurement of free C3d levels was developed together with the modified ELISA. To capture bound C3d on erythrocytes, ELISA plate were coated with anti-C3d and after incubation, blood samples were added for two hours. Bound erythrocytes were lysed with 100µl water perwell and the OD were read at 405nm. Findings: The levels of free C3d and bound C3d on the erythrocytes during complement activation was significantly increased compared to the control (800% and 500% respectively). Conclusion: Both free C3d and bound C3d as final dogradation product of C3d reflect the ongoing complement activation.