توليد و ارزيابي رده سلولي اپيتليالي شكل از بافت باله ماهي آزاد درياي خزر (Salmo trutta caspius)

Establishment and characterization of epithelial-like cell line from Caspian trout (Salmo trutta caspius) fin tissues

امروزه كشت سلول ابزار بسيار مفيدي براي پاسخ به بسياري از سوالات در زمينه­ ي زيست شناسي محسوب مي­شود و كاربرد رده ­هاي سلولي روز به روز در حال افزايش است. در اين مطالعه توليد كشت اوليه و Cell line ماهي آزاد درياي خزر (Salmo trutta caspius) مورد بررسي قرار گرفت و دو روش كشت اوليه Explant و روش جداسازي آنزيمي به كمك آنزيم تريپسين به منظور توليد كشت اوليه استفاده شد. مهاجرت سلول از باله هاي سينه­اي، پشتي، دمي و مخرجي در روش Explant با يكديگر مقايسه شد. تاثير مدت زمان­هاي مختلف تماس با تريپسين بر روي سلول­ها با يكديگر مقايسه شد. محيط كشت Leibovitz’s L-15 به همراه %20 FBS و %1 Pen-Strep استفاده شد. به منظور ارزيابي رده توليد شده، از سلول­ها كاريوتيپ تهيه شد و در نهايت اين سلول­ ها با كمك DMSO فريز شدند و به دماي C˚196- منتقل شدند. محاسبات كارايي كشت بافت نشان داد كه باله سينه­اي با ميانگين%71/31 بهترين باله به منظور توليد رده سلولي از اين ماهي است. در مقايسه كلي بين روش­هاي كشت اوليه، در روش جداسازي آنزيمي با آنزيم تريپسين نسبت به روش Explant، سلول­هاي زنده بيش تري حاصل شد. عدد كروموزومي سلول­ها 80=n2 بود و درصد زنده­ماني بعد از گذشت يك ماه در ازت مايع %84/4 بود . با توجه به اينكه اين سلول­ها تا 22 نوبت پاساژ و انجماد و ذوب متوالي، از قابليت رشد خوبي برخوردار بوده­اند، از آن ها مي توان در مطالعات مختلف استفاده كرد. اين سلول­ ها به عنوان اولين رده سلولي Cell Strain) ) از آبزيان توليد شده در كشور در بانك سلول هاي جانوري مركز ذخائر ژنتيكي و زيستي ايران (IBRC) با كدهاي CS2-1، CS2-2 و CSe و شماره دستيابي 3-IBRC C10190 نگهداري مي شود.

Cell lines provide an important biological tool for carrying out investigations into physiology studies and their applications are more growing every day. Here we tried to establish a cell line from Caspian salmon (Salmo trutta caspius). We used Caspian salmon fry and two primary culture methods, Explant and Enzymatic disaggregation were undertaken. Cell migration from pectoral, dorsal, caudal and anal fins was studied. Leibovitz’s L-15 with 20% FBS and 1% Pen-Strep was used as culture medium. Karyotyping was conducted to characterization of established cell line. Consequently cells were freezed with DMSO and stored at -196˚C. Explant Efficiency was showed that the best fin for explant is pectoral fin with the average of 71.31%. In comparison between two primary culture methods, enzymatic disaggregation with trypsin was more efficient. Chromosome counts were suggested 2n=80 and viability was 84.4% after one month storage in liquid nitrogen. Consequently, these cells have been subcultured, Freezed and defreezed over 22 times since their initiation and showed reasonable growth rate, therefor they can be used as cell lines in other studies. These cell lines can be reached at Iranian Biological Resource Center (IBRC) as the first aquactic animal cell strain with short names; CS2-1,CS2-2, CSe and IBRC C10190-3 catalogue numbers.