تعيين خصوصيات گونه‌هاي توكسين‌زاي آسپرژيلوس فلاوس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس جدا شده از خوراك دام

آفلاتوكسين‌ها، متابوليت‌هاي ثانويه توليد شده به وسيله بعضي از گونه‌هاي آسپرژيلوس به ويژه آسپرژيلوس فلاوس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس مي‌باشند كه باعث آلودگي مواد غذايي و يا خوراك دام مي‌شوند. اين مطالعه با هدف ارزيابي آلودگي خوراك دام به انواع آسپرژيلوس و تشخيص ژن‌هاي موثر در مسير سنتز آفلاتوكسين در آسپرژيلوس فلاوس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس جدا شده از خوراك دام انجام گرفت. تعداد 110 نمونه خوراك دام شامل سيلو، كنسانتره، علوفه و خوراك آماده از 30 گاوداري صنعتي و نيمه صنعتي استان خراسان رضوي جمع‌آوري و با استفاده از روش كشت آزمايشگاهي و واكنش زنجيره‌اي پليمراز مورد ارزيابي قرار گرفت. تعداد 68 (82/61%) سويه آسپرژيلوس از 110 نمونه خوراك دام مورد بررسي، جداسازي گرديد. بيشترين ميزان آلودگي به انواع آسپرژيلوس فوميگاتوس (81/21%)، سپس آسپرژيلوس فلاوس (27/17%)، آسپرژيولس نايجر (10%)، آسپرژيلوس پارازيتيكوس (18/8%) و آسپرژيلوس اروزيه (54/4%) تعلق داشت. از بابت ميزان آلودگي قارچي بين گاوداري‌هاي صنعتي و نيمه صنعتي هيچگونه اختلاف معني‌داري وجود نداشت (P>0.05). از آزمايش واكنش زنجيره‌اي پليمراز چندگانه براي تشخيص چهار ژن اصلي (nor 1, ver 1, omtA, aflR) مسؤول توليد آنزيم‌هاي كليدي در چرخه بيوسنتز آفلاتوكسين در آسپرژيلوس فلاوس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس استفاده گرديد. از 28 سويه آسپرژيلوس فلاوس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس جدا شده تعداد 10 جدايه (71/35%) واجد چهار ژن اصلي با باندهاي مشخص بودند. كليه جدايه‌ها از بابت توليد آفلاتوكسين با استفاده از روش كروماتوگرافي لايه نازك مورد تاييد قرار گرفتند. 18 جدايه (29/64%) داراي 1، 2 يا 3 باند بودند. نتايج به دست آمده در اين مطالعه نشان داد كه تشخيص سريع و اختصاصي قارچ‌هاي توكسين‌زا براي اطمينان از سلامت ميكروبيولوژيكي خوراك دام حائز اهميت مي‌باشد.

Aflatoxins are secondary toxic metabolites produced by some Aspergillus spp. particularly, Aspergillus flavus and A. parasiticus that contaminate food and feed. The objective of this study was to evaluate the contamination of feedstuffs with Aspergillus spp. and detect genes involved in the aflatoxin biosynthesis pathway of A. flavus and A. parasiticus isolates. A total of 110 cow feed sles (comprised of silage, concentrate, hay and total mixed ration) from 30 industrial and semi industrial dairy farms of Khorasan Razavi province, northeastern Iran, were examined using cultural and PCR methods. 68 (61.82%) Aspergillus spp. were isolated from 110 sles of feedstuff. The predominant Aspergillus isolates were A. fumigates (21.81%), followed by A. flavus (17.27%), A. niger (10%), A. parasiticus (8.18%), and A. oryzae (4.54%). Fungal contamination levels of industrial and semi industrial dairy farm sles were not significantly different (P>0.05). Using four sets of primers, a quadruplex PCR was developed to detect genes (nor1, ver1, omtA and aflR) at different loci coding enzymes in the aflatoxin biosynthesis pathway of A. flavus and A. parasiticus strains. Out of 28 strains of A. flavus and A. parasiticus, 10 isolates (35.71%) showed a quadruplet pattern indicating the important genes involved in the aflatoxin biosynthesis pathway, encoded for functional products. These isolates were confirmed to be aflatoxigenic by Thin Layer Chromatography. 18 isolates (64.29%) had three, two and single molecular patterns. The results obtained by this study show that rapid and specific detection of aflatoxigenic molds is important to ensure the microbiological safety of feedstuffs.