Serological Evaluation of Experimental Toxoplasma gondii Infection in Cats by Using Immunoblotting Based on an Affinity Purified Surface Antigen

توكسوپلاسما گونديي، تك ياخته‌اي است كه انسان و تقريبا همه حيوانات خون گرم آلوده مي‌كند. چرخه زندگي انگل شامل يك سيكل توليد مثل غير جنسي در ميزبان‌هاي واسط (پستانداران و پرندگان) و يك سيكل توليد مثل جنسي در ميزبان‌هاي نهايي (گربه سانان) مي‌باشد. گربه‌ها، هم ميزبان نهايي و هم ميزبان واسط اين تك ياخته هستند. هدف از اين مطالعه، بررسي حضور پادتن‌هاي ايجاد شده در گربه‌ها، متعاقب عفونت با سويه Rh توكسوپلاسما گونديي با استفاده از روش ايمنوبلات و بررسي كارايي روش ايمنوبلات طراحي شده با استفاده از آنتي‌ژن خالص سطحي (SAG1) حاصل از تكي زوآيت اين تك ياخته در تشخيص بيماري بود. به اين منظور، اقدام به ايجاد عفونت تجربي در گربه‌هاي سرم منفي، با استفاده از تزريق داخل صفاقي تكي زوآيت هاي تكثير شده در محيط كشت سلول هاي Vero گرديد. پس از آن، اقدام به رديابي حضور پادتن‌هاي IgG با دو روش ايمنوبلات و تست پادتن درخشان غير مستقيم گرديد. در ايمنوبلات انجام شده با آنتي ژن خالص سطحي، خطوط مثبت در منطقه مربوط به پروتيين‌هاي 30 كيلو دالتوني در فاصله زماني هشت روز پس از عفونت ديده شدند. خطوط مثبت در گروه كنترل كه از محيط كشت حاوي Vero Cell هاي بدون تك ياخته دريافت كرده بودند ديده نشد. نتايج مثبت و منفي، با نتايج تست استاندارد IFAT در توافق كامل بودند. نتايج اين بررسي نشان داد كه ايمنوبلات طراحي شده بر مبناي يا آنتي ژن خالص سطحي، تست تشخيصي مناسبي جهت تشخيص سرولوژيك پادتن‌هاي ضد T. gondii در گربه‌هايي كه به تازگي با اين تك ياخته آلوده شده‌اند مي‌باشد.

Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite that infects human and almost all warm-blooded animals. The life cycle of the parasite includes an asexual reproduction in intermediate hosts (Mammals and birds) and a sexual reproduction in definitive hosts (Felidae). Cats are both the intermediate and the definitive host for T. gondii. The aim of this study was to investigate anti-T. gondii antibodies in cats by using an immunoblot method based on a major surface antigen; SAG1. Six sero-negative kittens were infected intra-peritoneally by Rh strain of T. gondii. Serum samples were collected and evaluated for the presence of IgG antibodies by using two techniques; immunoblotting and indirect fluorescent antibody test (IFAT).SAG1 based immunoblotting was able to detect anti-T. gondii antibodies at least eight days after infection. Comparative evaluation showed that this method is as sensitive as IFAT to diagnose T. gondii infection in cats.