كلونينگ و بيان ژن اپسيلون كلستريديوم پرفرينجنز تيپ D سويه واكسينال در E. coli به عنوان ميزبان واكسينال نوتركيب

Cloning and expression of Clostridium perfringens type D vaccine strain epsilon gene in E. coli as a recombinant vaccine candidate

كلستريديوم پرفرينجنز يك باكتري گرم مثبت بي هوازي اجباري و قادر به توليد اسپور هاي مقاوم گسترده در محيط است. كلستريديوم پرفرينجنز بر اساس توليد چهار توكسين اصلي آلفا، بتا، اپسيلون و يوتا، به پنج تيپ A تاE طبقه بندي مي گردد. هدف مقاله حاضر كلونينگ و بيان ژن توكسين اپسيلون كلستريديوم پرفرينجنز تيپ D سويه واكسينال است. DNA ژنوميك استخراج و ژن توكسين اپسيلون با استفاده از DNA Pfu پلي مراز تكثير داده شد. محصول PCR در كلونينگ وكتور PJET1.2/blunt كلون شد. وكتور نوتركيب pJETε از طريق پرايمر هاي جهاني تعيين توالي گرديد. در گام بعدي ژن توكسين اپسيلون مجددادر يك وكتور بياني PET22b(+) كلون و به سويه ميزبانE. Coli Rosetta(DE3) ترانسفورم شد. بعداز كلونينگ مجدد ژن etx كلستريديوم پرفرينجنز در وكتور بياني، پروتئين نوتركيب در سلول هاي E. coli Rosetta (DE3) بيان گرديد. نتيجه گرفتيم كه سويه E.coli Rosetta براي بيان پروتيئن نوتركيب اپسيلون كلستريديوم پرفرينجنز از وكتور بياني pET22ε مناسب مي باشد.اين سلول نو تركيب مي تواند به منظور تحقيقات بيشتر روي گسترش واكسن نوتركيب مورد استفاده واقع شود.

Clostridium perfringens , aGram-positive obligate anaerobic bacterium , is able to form resistant spores which are widely distributed in the environment. C. perfringens is subdivided into five types A to E based on its four major alpha, beta, epsilon and iota toxins. The aim of the present study was cloning and expression of C. perfringens type D vaccine strain epsilon toxin gene.Genomic DNA was extract ed and the epsilon toxin gene was amplified using Pfu DNA polymerase. The PCR product was cloned into pJET1.2/blunt cloning vector. The recombinant vector (pJETε) was sequenced using universal primers. At the next step epsilon toxin gene was subcloned into pET22(+) expression vector and transformed into E. coli Rosetta (DE3) host strain.The recombinant protein has been expressd in E. coli Rosetta (DE3) cells after subcloning of C. perfringens etx gene into the expression vector.We concluded that E. coli Rosetta strain was suitable for the expression of recombinant C. perfringens epsilon toxin protein from pET22ε expression vector. This recombinant cell can used for further research on recombinant vaccine development.