بررسي ميزان توليد آنزيم ليپاز توسط پني سيليوم كرايزوژنوم سويه ي KC884440.1 بهينه سازي شرايط دمايي و بررسي ارتباط ما بين قدرت ترشح آنزيم ليپاز و بيماريزايي ميكروارگانيسم

امــروزه ليپازهــا بيوكاتاليســت هــاي مهمــي هســتند كــه واكنشــهاي بــا ارزشــي را هــم در محيــط آبــي و هــم در محيــط غيــر آبــي انجــام مــي دهنــد. در ميــان ليپازهــاي گياهــي، حيوانــي و ميكروبــي، ليپازهــاي ميكروبــي بيشــترين كاربــرد را دارنــد. زيــرا ميكروبهــا مــي تواننــد براحتــي كشــت داده شــوند و ليپازهــاي حاصــل از آنهــا مــي توانــد بــه راحتــي طيــف وســيعي از واكنشــهاي هيدروليتيكــي و ســنتزي را كاتاليــز كننــد. ليپازهــا در زمينــه هــاي گســترده اي از علــم بيوتكنولــوژي بويــژه لبنيــات (رســيدن پنيــر، بهبــود و توســعه طعــم، توليــد پنيــر اصــلاح شــده آنزيمــي EMC(، شــوينده هــا، مــواد دارويــي (ايبوپروفــن، ناپروكســن)، مــواد شــيميايي، كشــاورزي (آفــت كشــها، حشــره كــش هــا) و شــيمي روغــن (هيدروليــز چربــي و روغــن، ســنتز بيوســورفاكتانت) كاربــرد دارنــد. و در ســالهاي آينــده در بســياري از زمينــه هــاي جديدتــر بــه عنــوان يــك بيوكاتاليســت بالقــوه كاربــرد خواهنــد داشــت. از ليپازهــاي قارچــي بــه خاطــر هزينــه پاييــن اســتخراج، مقاومــت بــه pH و حــرارت، گزينــش پذيــري سوبســترا و فعاليــت در حــلال هــاي آلــي در مقايســه بــا ليپازهــاي باكتريايــي بيشــتر اســتفاده مــي شــود. تعــداد 20 نمونــه از خــاك جنگلــي ناهــار خــوران گــرگان جمــع آوري و بــه آزمايشــگاه دانشــگاه آزاد اســلامي واحــد گــرگان منتقــل شــد.عمل رقــت ســازي روي نمونــه هــاي خــاك انجــام و نمونــه هــا بــه ميــزان 10 -5 بــار رقيــق و مقــدار يــك ميلــي ليتــر از هــر نمونــه بــه محيــط كشــت هــايPDA و YGC منتقــل شــد . در مرحلــه ي خالــص ســازي بــا توجــه بــه رشــد بهتــر قــارچ هــا روي هــر محيــط كشــت عمــل خالــص ســازي روي همــان محيــط انجــام شد.شناســايي اوليــه بــر اســاس مرفولــوژي كلنــي و بررســي ميكروســكوپي و مطابقــت بــا كتــاب قــارچ شناســي پزشــكي (امامــي) انجــام شــد . در ايــن مرحلــه جدايــه هــاي قارچــي جداســازي و شناســايي مقدماتــي شــدند توانايــي توليــد آنزيــم ليپــاز قــارچ هــا بــا محيــط كشــت اختصاصــي تــري بوتريــن آگار بررســي گرديــد و قــارچ هــاي توليــد كننــده ي آنزيــم براســاس شــعاع هالــه هيدوليــز شناســايي و انتخــاب شــدند . در ايــن مرحلــه 20 جدايــه توانايــي توليــد آنزيــم ليپــاز را داشــتند. پــس از انجــام اســتخراج DNA ريبوزومــي (sRNA 18) و انجــام عمــل PCR ســنجش كمــي آنزيمهــا بــه روش اســپكتوفتومتري در طــول مــوج 410 نانومترانجــام شــد. قــارچ پنــي ســليوم كرايزوژنــوم بــه علــت داشــتن بيشــترين ميــزان ترشــح آنزيــم ليپــاز بــراي شناســايي مولكولــي و تعييــن توالــي بــه آزمايشــگاه ميكــروژن كــره جنوبــي ارســال گرديــد. شناســايي مولكولــي نيــز انتســاب قــارچ جــدا شــده بــه پنــي ســيليوم كرايزوژنــوم ســويه ي KC884440.1 را تاييــد نمــود. بــالا بــودن چربــي و افزايــش آنزيــم ليپــاز در بــدن ميتوانــد عوارضــي همچــون پانكراتيــت داشــته باشــد. ايــن قــارچ توليــد كننــده ي آنتــي بيوتيــك پنــي ســيلين ميباشــد كــه از رشــد اســتافيلوكوك هــا جلوگيــري ميكنــد امّــا در مباحــث قــارچ شناســي پزشــكي آن را يكــي از عوامــل عفونــت هــاي فرصــت طلــب در بيمارانــي اســت كــه داراي سيســتم ايمنــي ضعيــف ميباشــند نيــز معرفــي ميكننــد .بــا توجــه بــه نتايــج تحقيقــات آقــاي نصراللهــي در ســال 1393 كــه بيــان داشــت ژن هــاي كــد كننــده ي آنزيــم ليپــاز و ترشــح ليپــاز يكــي از فاكتورهــاي بيماريــزاي ميكروارگانيســم هاســت بررســي شــرايط بهينــه ســازي توليــد بــا دو پارامتــر دمــا و pH انجــام شــد . دكتــر شــهلا شــادزي در كتــاب قــارچ شناســي پزشــكي(جهاد دانشــگاهي اصفهــان 1379 ص 328 ) و بخــش عفونــت هــاي قارچــي فرصــت طلــب در افــراد مبتــلا بــه نقــص ايمنــي مينويســد : « چنانچــه قارچــي بتوانــد حــرارت بــدن ميزبــان مســتعد (انســان 37 درجــه ســانتي گــراد) را تحمــل نمايــد و قــادر بــه توليــد آنزيــم هــاي و توكســين هــاي لازم جهــت تخريــب بافــت باشــد ، مــي توانــد بيماريــزا محســوب گــردد . در آزمايشــات جهــت بررســي شــرايط بهينــه ي توليــد آنزيــم مشــاهده گرديــد در شــرايط تقريبــا اســيدي )pH=6( و دمــاي 37 درجــه ســانتي گــراد ايــن ســويه ي قارچــي نــه تنهــا توانايــي توليــد آنزيــم را دارد بلكــه بهينــه تريــن شــرايط ترشــح آنزيــم نيــز هميــن شــرايط اســت .