بررسي و شناسايي آلودگي ورتيسيليومي در باغات زيتون شهرستان زهك با استفاده از تكنيك هاي Real-time PCR و Nested PCR

پژمردگي ورتيسيليومي ناشي از قارچ Verticillium dahliae يكي از مهم ترين بيماري هاي تهديد كننده زيتون در سراسر جهان، از جمله باغات زيتون در ايران است.با توجه به توسعه اخير كشت زيتون در منطقه سيستان اين پژوهش جهت بررسي انتشار اين بيماري و آلودگي درختان زيتون در منطقه سيستان انجام گرفته است.بدين منظور نمونه برداري از 20 درخت مشكوك با داشتن علائمي مانند سرخشكيدگي و ريزش برگ، از بخش هاي مختلف باغات زيتون پژوهشكده كشاورزي دانشگاه زابل و مركز تحقيقات كشاورزي زهك صورت گرفت. پس از استخراج DNA آناليز Real-time PCR با استفاده از پرايمرهاي ITS اختصاصي V. dahliae انجام شد. از تعداد 20 نمونه (درخت) تست شده كه از ارقام زرد، روغني و كرونايكي بودند تعداد 12 نمونه آلودگي به V. dahliae را نشان دادند. در ادامه با هدف تعيين پاتوتايپ عامل بيماري، از پرايمرهاي اختصاصي ايزوله هاي V. dahliae نوع D و ND براي تست Nested PCR نمونه هاي DNA كلي استخراج شده از 12 نمونه ي برگي درختاني كه آلودگي آن ها مورد تاييد قرار گرفته بود استفاده شد. نتايج نشان داد پاتوتايپ عامل بيماري از نوع ND مي باشد،در انتها براي راستي آزمايي نتايج، محصول واكنش زنجيره اي پليمراز به شركت Macrogen كره جنوبي ارسال و توالي يابي شد و با استفاده از نرم افزار بلاست در وب سايت (NCBI- Blast Search) درصد تشابه توالي ناحيه مورد مطالعه در V. dahliae با توالي هاي ثبت شده در پايگاه NCBI تعيين شد، كه اكثريت توالي هاي ثبت شده در سطح حدود 98 درصد بيشترين تشابه را با توالي هاي بدست آمده داشتند كه اين نتايج بر اين دلالت دارد كه محصولات واكنش زنجيره اي پليمراز به درستي تكثير شده اند.