حذف ژن پروزامين سنتتاز در باكتري بروسلا ملي تنسيس Revl

هدف از اين مطالعه، بكارگيري تكنيك حذف ژني در باكتري بروسلا ملي تنسيس Revl بمنظور دستيابي به يك سويه تضعيف شده، مي باشد. لذا ژن كدكننده آنزيم پروزامين سنتتاز (per) كه يكي از ژن هاي درگير در تشكيل ساختار زنجيره o از LPS مي باشد، از طريق انجام نوتركيبي همساخت، حذف گردد. نوتركيبي همساخت با استفاده از وكتور خودكشي حامل كاست حذف كه شامل ترادف كدكننده مقاومت به كانامايسين (kan) بهمراه ترادف هاي بالا دست و پايين دست ژن per در طرفين آن بود، صورت گرفت. كاست حذف با انجام واكنشهاي PCR سه مرحله اي با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ساخته شد و بمنظور ساخت وكتور خودكشي، درون وكتور (-) pBluescriptIISK كلون گرديد. بدنبال انتخاب سويه موتان، حذف ژن per با انجام واكنشهاي PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي و تعيين توالي قطعه تكثير يافته، بررسي شد. با مقايسه محصول واكنشهاي RT-PCR انجام يافته از سويه هاي وحشي و موتان، عدم بيان PER بررسي شد. سويه حاصل يك سويه موتان داراي نقص در ساختار LPS خود بوده و درنتيچپجه علاوه بر كاهش خطا در تمايز ما بين حيوان واكسينه شده و آلوده در تست هاي تشخصي، مي تواند با انجام تست هاي ايمنولوژيكي بعنوان يك سويه كانديد واكسن مورد بررسي قرار بگيرد.