بيان ژن فاكتور FVIII انعقادي نو تركيب انساني در غدد شيري موش ها ترانس ژنتيك

هموفيلي يك بيماري ژنتيكي وابسته به جنس است و عموما افراد مذكر را درگير مي كندكه در حدود يك مورد از هر 10 هزار مورد تولد رخ مي دهد. اين بيماري در اثر نقص يا جهش در ژن فاكتور 8 يا ژن فاكتور 9 ايجاد مي شود. ژن فاكتور 8 (FVIII)، ژن نسبتا بزرگي بوده و حدود 2351 اسيد آمينه با 26 اگزون تشكيل شده و يك mRNA به طول 9 Kb را رونويسي مي كند. هدف اساسي اين مطالعه جداسازي و كلونينگ فاكتور FVIII نوتركيب انساني و بيان آن در غدد شيري موش جهت بيان فاكتورVIII نوتركيب (rFVIII) بود. براي تهيه يك پلاسميد نو تركيب يك قطعه برشي NotI از پلاسميد ناقل ژن فاكتور (PCMV5-hFVIII) از ژل آگاروز تخليص و داخل پلاسميد pUCWAP6 ناقل پروموترهاي اختصاصي بافت 4.1kbp mWAP در منطقه ~1.6 kbp mWAP 3 UTR الحاق شد. سپس پلاسميد نو تركيب پس از الكتروفورز ژل آگاروز تلخيص شده به درون هسته اوليه تخم هاي سفيد كونمينگ بارور شده به طور هم زمان تزريق گرديد. بيان فاكتور FVIII نو تركيب توسط روش هاي RT-PCR ، الايزا، SDS-PAGE و وسترن بلات مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها نتايج به دست آمده نشان دهنده بيان موفقيت آميز ژن فاكتور FVIII و توليد آن در غدد شيري بود.