بهينه سازي بيان و استخراج پروتئين پوششي ويروس تريستزاي مركبات در باكتري Ecoli

ويروس تريستزاي مركبات مهم ترين بيمارگر مركبات مي باشد، بدليل گسترش و شيوع بيماري در ايران مديريت كنترل آن اهميت بسزايي دارد از اينرو تشخيص به موقع و ارزان بيماري نياز به بكارگيري روش مناسب دارد و جهت تهيه آنتي بادي براي تشخيص نياز به تامين منبع آنتي ژن ويروسي مي باشد. در اين تحقيق ژن پروتئين پوششي ويروس تريستزا(CTV-cp25) ازنمونه هاي آلوده جداسازي و سپس اين ژن دروكتور بياني pET28a(+) همسانه سازي شد واين وكتور بياني حاوي ژن مورد نظر واردباكتري Ecoli سويه BL21 گرديد و به مدت يك شب در محيط LB و دماي 37 درجه همراه با تكان رشد داده شد و پس از واكشت در روز بعد، بيان پروتئين پوششي با استفاده از IPTG القا گرديد. جهت بهينه كردن شرايط بيان پروتئين، ابتدا دو فاكتور دما و مدت زمان انكويه شدن باكتري در حضور IPTG مورد بررسي قرارگرفت. تيمارهاي زماني به صورت (2، 4 و 6ساعت) و تيمارهاي دمايي به صورت (28، 30 و 37 درجه سانتي گراد) بودند كه پس از القاء انجام آزمايش، بهترين نتايج در دماي 28 درجه طي زمان 4 ساعته بدست آمد ونمونه برداري در زمان هاي مختلف پس از القاء انجام شد و پروتئين محلول با استفاده از كروماتوگرافي ميل تركيبي استخراج و در SDS-PAGE تفكيك شد، نتايج اين تحقيق نشان داد كه cp ويروس در سلول باكتري بيان شد.