همسانه سازي ژن زنجيره سنگين آنتي بادي ضد ويروس هاري در ناقل ويروسي به منظور بيان در گياه

در دوه دهه گذشته، سيستم هاي بيان گياهي به عنوان بستري مناسب براي توليد پروتئين هاي درماني توسعه يافته اند . گياهان نسبت به ديگر سيتم هاي بياني، از جمله سيتسم هاي باكتريايي و حيواني داراي مزاياي قابل ملاحظه اي مي باشند . ناقلهاي ويروسي گياهي استراتژي نويد بخشي را براي بيان موقت ژن در گياهان ارائه مي كنند . دستكاري ژنتكي در اين سيتسم هاي بيان گذار، در مقايسه با بيان پايدار پروتئين هاي نوتركيب ، بسيار آسان تر مي باشد . همچنين اين سيستم ها مي توانند پروتئين هاي نو تركيب را بسيار سريع تر توليد كنند . در اين پژوهش ، يك وكتور بياني بياني از الحاق ژن اپتيمايز شده زنجيره سنگين آنتي بادي ضد ويروس هاري (Hea) و PVX (يك وكتور ويروسي گياهي) ، بمنظور بيان موقت اين ژن در گياه ، ساخته شد. سپس توالي هاي Kozak و KDEL به ترتيب به انتهاي 5 و 3 ژن Hea افزوده شدند . آغازگرهاي مناب با توجه به توالي هاي دو انتهاي ژن Hea و محل هاي برشي مناسب طراحي شدند . در نهايت ژن Hea پس از تكثير توسط PCRدر ناقل ويروسي PVX همسانه سازي شد . ناقل بياني حاوي ژن مورد E. coli تكثير و سپس به باكتري Agrobacterium tumefaciens منتقل گرديد . نتايج همسانه سازي اين ژن با تفستفاده از روش هاي مولكولي ColonyPCR هضم آنزيمي و در نهايت توالي يابي مورد تاييد قرار گرفت . بدني ترتيب اگروباكتريوم نو تركيب به منظور انتقال ژن Hea با روش اگرواينفيلتر اسيون به گياه تنباكو، آماده سازي شد .