اRefolding و تخليص همزمان آنزيم نوتركيب پرولين دهيدروژناز درسامانه هاي دوفازي آبي

زمينه وهدف: پرولين دهيدروژناز عضوي از خانواده فلاوآنزيم ها مي باشد كه نقش مهمي را درمسير متابوليسم پرولين به گلوتامات ايفا مي نمايد. دراين مطالعه، استفاده از سامانه هاي دوفازي آبي به عنوان يك روش جديد جهت refolding و تخليص همزمان آنزيم نوتركيب پرولين دهيدروژناز از اجسام اين كلوژن ارائه شد. روش ها: refolding و تخليص پرولين دهيدروژناز نوتركيب درسامانه هاي دو فازي آبي متشكل ازپلي اتيلن گليكول و كربنات سديم بررسي شد. اثر پارامترهايي مانند نوع نمك و غلظت كلريد سديم بر تفكيك آنزيم هدف مورد بررسي قرار گرفتند. صحت خالص سازي آنزيم نوتركيب نيز توسط الكتروفورز SDS-PAGE آزمايش شد. نتايج: بالاترين بازده (63/09 درصد) و فاكتور تخليص (26/94) درسامانه دوفازي حاوي 14 درصد پلي اتيلن گليكول 1000 دالتون و 12درصد كربنات سديم حاصل شد. آنزيم نوتركيب در فاز بالايي غني از پلي اتيلن گليكول تخليص شد و افزايش غلظت كلريد سديم باعث كاهش موثر تفكيك آنزيم پرولين دهيدروژناز گرديد. وزن مولكولي آنزيم با استفاده از SDS-PAGE در حدود 40kDa تخمين زده شد. فعاليت ويژه ي پرولين دهيدروژناز تخليص شده در اين مطالعه 1200U/mg به دست آمد. بحث و نتيجه گيري: درمجموع، نتايج بدست آمده، تاييد كردند كه سامانه هاي دوفازي آبي پلي اتيلن گليكول و كربنات سديم مي تواند به عنوان يك تفكيك تلفيقي جهت انجام refoldingو تخليص همزمان پرولين دهيدروژناز نوتركيب از اجسام اين كلوژن مورد استفاده قرار گيرد.