طراحي و ساخت كلون بيان كننده داروي ضد انعقادي دسيرودين (هيرودين) به شكل خارج سلولي در اشرشيا كلي

اهداف: در اين تحقيق، استفاده از Signal sequence مورد توجه قرار گرفته است با توجه به اينكه هيرودين به طور طبيعي فاقد Signal sequence است، در نظر گرفته شده است كه با الحاق اين بخش به ژن هيرودين و بيان پروتئين هيرودين، مكان ترشح پروتئين به فضاي پري پلاسميك با محيط خارج سلول و با سيتوپلاسم مشخص گردد و پروتئين محلول به دست آيد. مواد و روش ها: ترادف 66 نوكلئوتيدي واريانت HV3 ژن هيرودين تهيه و داخل يك وكتور بياني قوي (خانواده pET) انتقال داده شد. براي تسهيل درتخليص پروتئين از His-tag در انتهاي N ژن استفاده شد. سيگنال پپتيد pelB در ابتداي ژن با هدف ترشح به فضاي پري پلاسميك و محيط كشت درج شد و بيان توسط سويه OrigamiB(DE3) اندازه گيري شد. در نهايت محصول توليدي در سيتوپلاسم، فضاي پري پلاسمي و محيط كشت اندازه گيري شد. نتايج: با روش SDS-PAGE بيان پروتئين ديده شد و با وسترن بلاتينگ بيان پروتئين هيرودين تاييد شد. نتايج نشان داد مقدار پروتئين بيشتري در فضاي پري پلاسمي بيان شده و مقدار كمي پروتئين به محيط كشت نيز ترشح شد.