ﺑﺮرﺳﯽ ﭘﺎﯾﺪاري ژﻧﺘﯿﮑﯽ ﮔﯿﺎﻫﭽﻪ ﻫﺎي ﺣﺎﺻﻞ از ﮐﺸﺖ ﺑﺎﻓﺖ اﺳﺘﻮﯾﺎ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﻧﺸﺎﻧﮕﺮ ISSR

Evaluation of genetic stability of seedlings obtained from stevia tissue culture using ISSR marker

استويا (Stevia rebaudiana) شيرينت رين گياه جهان است. بذور اين گياه به سختي جوانه زده و بسياري از آنها به دليل پديده خودناسازگاري در هنگام شكل گيري غالباً پوك و عقيم هستند. تكثير استويا از طرق بذر مانع توليد جمعيت همسان ميشود. به همين دليل، كشت بافت روش مناسبي براي تكثير سريع اين گياه ميباشد. با توجه به اينكه وقوع تنوع سوماكلونال پديده اي شايع درارتباط با كشت بافت گياهي است. هدف از اين پژوهش تعيين پايداري ژنتيكي گياهچه هاي حاصل از ريزازديادي استويا در محيط هايي با غلظت هاي متفاوت تنظيم كننده هاي رشد مي باشد. مواد و روشها: اين پژوهش در دو آزمايش جداگانه به اجرا در آمد. در آزمايش اول، مريستم ها روي محيط كشت MS با غلظتهاي 1و 2 ميلي گرم در ليتر براي هر كدام از تنظيمكننده هاي رشد گياهيNAA ، BAP ، و 2,4_D كشت شدند. آزمايش به صورت فاكتوريل بر پايه طرح كاملاً تصادفي با 3تكرار انجام گرفت . آزمايش دوم شامل استخراج DNA از گياهچه هاي تكثيرشده در ازمايش اول و ارزيابي چند شكلي نشانگرهاي ISSR مي باشد. تنوع ژنتيكي با استفاده از 10 نشانگر ISSR تحت بررسي قرار گرفت. در آزمايش اول اثر تنظيم كننده هاي رشد بر كليه صفات معني داري بودP<0.01 ، محيط كشت MS حاوي 1 ميلي گرم در ليترNAA به همراه 2 ميلي گرم در ليتر BAP موثرترين تيمار در بيشترين تعداد شاخه فرعي و تعداد برگ و ارتفاع گياه بود. در آزمايش دوم، نمونه هاي مورد مطالعه در2 گروه دسته بندي شدندكه بر اين اساس دو نمونه اي كه تحت غلظت بالاي BAP قرار داشتند جدا از ساير نمونه ها دسته بندي شدند. اين نتيجه بيانگر كارايي مناسب نشانگر مورد استفاده در تفكيك نمونه هاي مورد مطالعه و پوشش ژنومي مناسب پرايمرهاي مورد استفاده است.

Stevia is the sweetest plant in the word. Seeds of this plant hardly germinare, and many of them are often empaty and sterile due to the phenomenon of self incompitability during formation. Stevia propagation through the seed prevent homogenous population production. For this reason, Tissue culture is a suitable method for rapid propagation of this plant. Considering, the occurrence of Somaclonal variation is a common phenomenon associated with plant tissue culture, the aim of this study was to determine the genetic stability of Stevia micropropageted seedling s in media with different concentration of growth regulators. This study was conducted in two separate experiments. In the first experiment, Meristem were cultured on MS media at concentration of 1 and 2 mg/l for each of the plant growth regulators. The experiment was carried out as a factorial based on completely randomized design with 3 replications. The second experiment involved extracting DNA from seedlings propagated in the first experiment and evaluating the polymorphism of ISSR markers. Genetic diversity was evaluated using 10 ISSR primers. In the first experiment, the effect of growth regulators on all traits was significant MS medium containing 1 mg / l NAA plus 2 mg / l BAP was the most effective treatment for the highest number of branches and number of leaves and plant height. In the second experiment, The studied samples were divided into two groups. samples with high BAP concentration were categorized separately from other specimens. This result demonstrates the good efficiency of the marker used in the isolation of the studied samples and the appropriate genomic coverage of the primers used.