شناسايي مجدد جهش مطلوب مرتبط با صفت چند قلوزايي در ژن گيرنده استروژن II با طراحي آغازگرهاي جديد و روش توالي يابي در گوسفند رومانوف

Double confirmation for the presence of the favorable mutation associated with the litter size in the Estrogen Receptor gene using novel primers design and sequencing methods in Romanov sheep

در سالهاي اخير، گوسفند نژاد رومانوف به دليل خصوصيات ممتاز توليد مثلي مورد استقبال گسترده دامداران كشور قرار گرفته است، با اينحال، آنچه مسلم است همه قوچهاي اين نژاد حامل اللهاي مطلوب مزتبط با چند قلوزايي نيستند. تاكنون، تلاشهاي تيمهاي تحقيقاتي براي شناسايي مكانيزم مولكولي كنترل كننده بي نتيجه بوده است. اخيراً، با استفاده از تكنيك مطالعه پويش كل ژنوم، يك پلي مورفيسم جديد معني دار(مرتبط با دوقلوزاي در در كروموزوم شماره 7 گوسفند رومانوف (rs423810437 ) واقع در ناحيه بالادست پروموتور ژن گيرنده هورمون استروژن تيپ 2 گزارش شد ( الل C با افزايش دوقلوزايي مرتبط است). با اين انگيزه تحقيقاتي، هدف پژوهش حاضر شناسايي مجدد جهش مطلوب مرتبط با صفت چند قلوزايي در ژن گيرنده استروژن II با طراحي آغازگرهاي جديد و روش توالي يابي آن در گوسفند رومانوف مي باشد. بدينمنظور، در مجموع تعداد 70 ميش رومانوف با سابقه توليد مثلي انتخاب و استخراج DNA، واكنش زنجيره پلي مراز پس از مرحله طراحي آغازگرهاي جديد و الكتروفوز و رنگ آميزي مطابق دستورالعمل هاي روتين انچام پذيرفت و سپس، محصولات حاصل از تكثير انفرادي( 60 نمونه) براي توالي يابي سانجر به كشور چين ارسال شد. پس از بررسي كيفيت، نتايج خام توالي يابي ، با استفاده از آناليز بيوانفورماتيكي و عمليات همرديفي نوكلئوتيدي، حضور جهشT/C) ) مجدد تاييد كرد و آزمون ارتباط سنجي آماري نشان داد كه ميشهاي حاوي كلاس الليC در مقايسه با T، به طور معني دار چند قلوزايي بيشتري را داشتند( P 0.01). با وجود اينكه اين گزارش اولين بار در رومانوف مي باشد اما، با توجه به اهميت موضوع بررسي هاي مجدد نتايج اين مطالعه در جمعيتهاي ديگر رومانوف و تعداد نمونه بيشتر توصيه مي گردد.

In recent years, Romanov sheep have been widely welcomed breed by breeders in the country due to their excellent reproductive qualities. However, is that not all bucks in this breed exhibit desirable traits associated with litter size. So far, efforts by research teams to identify the controlling molecular mechanism have been unsuccessful. Recently, using the GWAS technique, a significant new polymorphism (associated with litter size) on chr. 7 of Romanov sheep (rs423810437) was reported, localizing in the upstream region of the promoter of the estrogen hormone receptor Gene 2 (C allele with pregnant twins). With this research motivation, the goal of the current research is to re-identify the desired mutation associated with multiple tripling of estrogen receptor II gene by developing new primers and their sequencing method in Romanov sheep. For this purpose, a total of 70 Romanov sheep were collected with the reproductive history of selection and DNA extraction, polymerase chain reaction after the new primer design phase, and electrophoresis and staining according to routine laboratory instructions, and then obtained the PCR amplicons that individually replicated (60 samples) were sent to BGI company, china for Sanger sequencing. After checking the quality, the raw sequencing results using bioinformatics analysis and nucleotide alignment operations again confirmed the presence of the T/C mutation, and the statistical correlation test showed that mice containing the C allele class compared to T mice had significantly more multiple births (P 0.01). Although this report is for the first time in Romanov, due to the importance of the issue, a re-examination of the results of this study in other Romanov populations and more samples is recommended