اثرات ضد باكتريايي تركيب دارويي وانكومايسين/تري متوپريم بر بيان ژن blaCTX-M33 در اشريشيا كلي توليد‌كننده بتالاكتامازهاي وسيع‌الطيف جدا شده از بيماران مبتلا به عفونت ادراري

Antibacterial therapy of Vancomycin/Trimethoprim on expression level of blaCTX-M33 gene of ESBL-producing Escherichia coli isolated from patients with urinary tract infection

استفاده از تركيب دارويي يكي از راهكارهاي طلايي جهت درمان عفونت هاي ناشي از باكتري هاي توليد كننده بتا لاكتامازهاي وسيع الطيف (ESBLs) از قبيل اشريشيا كلي توليد كننده ESBL مي باشد. هدف اصلي از پژوهش حاضر ارزيابي اثرات ضد باكتريايي تركيب دارويي ونكومايسين/تري متوپريم بر ميزان بيان ژن هاي مقاومت بتالاكتاماز blaCTX-M33 در اشريشيا كلي مقاوم جدا شده از بيماران مبتلا به عفونت ادراري مراجعه كننده به بيمارستان شهيد رجايي گچساران بوده است. در ابتدا 90 جدايه اشريشيا كلي از بيماران مبتلا به عفونت ادراري جدا و شناسايي گرديد و متعاقبا، با استفاده از روش تاييدي ديسك تركيبي جدايه هاي مولد ESBLs بر اساس پروتوكل استاندارد M100-S23 CLSI مورد شناسايي قرار گرفت. در خصوص داروي تركيبي ذكر شده ابتدا حداقل غلظت ممانعت كننده از رشد (MIC) دارو بصورت انفرادي و در حالت تركيب با استفاده از روش ميكرودايلوشن براث و تحت پروتوكل استاندارد M07‑A10 CLSI انجام و بدنبال آن شاخص غلظت مهاري كسري (FIC) تعيين شد. در نهايت ميزان نسبي بيان ژن blaCTX-M33 با استفاده از تكنيك qPCR مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها حاكي از شناسايي 15 جدايه (24 %) به عنوان ESBLs بود. همچنين اثرات هم افزايي مناسبي ازتركيب تري متوپريم/ونكومايسن در جدايه هاي مولد ESBLs با FIC بميزان 5/1-281/0 شناسايي شد. در نهايت، تركيب دو دارو بيانگر كاهش معنا دار بيان نسبي ژن blaCTX-M33 در تمام غلظت هاي آزمايش شده بميزان 85/1 تا 16/2 واحد بود. در واقع، در غلظت هاي مورد آزمايش اين كاهش معادل 5953 و 8477 برابربوده كه باعث سركوب شدن بيان ژن و متعاقبا متوقف شدن مقاومت دارويي شده است. نتايج حاصل از آزمايش نشان داد كه تركيب ونكومايسين/ تري متوپريم مي تواند براي درمان عفونت هاي ادراري بسيار كارآمدتر باشد و مقاومت دارويي بالاي جدايه هاي توليد كننده بتالاكتاماز در عفونتهاي ادراري را بشدت كاهش دهد.

Combination therapy could be one of the gold strategies for the treatment of extended‑spectrum β‑lactamases )ESBLs(-producing bacteria such as ESBL-Escherichia coli. We aimed to evaluate the antibacterial effects of Vancomycin/Trimethoprim combination on β-Lactamase resistant gene of E. coli isolated from patients with urinary tract infection referring to the Shahid Rajaii hospital of Gachsaran. Firstly, 90 isolates of E. coli were identified from patients with UTIs and subsequently, ESBLs isolates were identified using the confirmatory combined disc method based on CLSI guidelines (M100-S23). The combination index assay was performed via microdilution broth test (M07‑A10) and interpreted with the fractional inhibitory concentration (FIC) for vancomycin alone and in combination with trimethoprim. Eventually, the relative expression level of blaCTX-M33 3 gene was determined using qPCR. Findings showed that 15 isolates (24%) were identified as the ESBLs. Data indicated that combination of vancomycin/Trimethoprim with exerted synergistic effects in ESBLs isolates with FIC index ranged from 0.281 to 1.5. On the other hand, combination of vancomycin /Trimethoprim could reduce significantly the expression level of blaCTX-M33 gene in different concentrations tested ranging from 1.85 to 2.16 fold based on MICs. Indeed, the expression level of blaCTX-M33 was down-regulated 5953 and 8477 fold, respectively, causing knockdown of gene expression. These results suggest the possibility of vancomycin/Trimethoprim to treat UTIs with a higher efficiency. It is concluded that Vancomycin/Trimethoprim combination may diminish resistance in the E. coli‑producing ESBL isolated from UTI patients.