بررسي بيان ژن ليزوزيم نوع-C در بافت‌هاي قدامي كليه، كبد، پانكراس و طحال مولدين ماهي قره برون (Acipenser persicus Borodin, 1897) با استفاده از روش real time RT-PCR

Investigation of the expressions of the C-type Lysozyme gene in head kidney, liver, pancreas and spleen tissues in persian breeding sturgeon (Acipenser persicus Borodin, 1897) by using real time RT- PCR assays

ليزوزيم‌ها از مهم‌ترين پروتئين‌هاي سيستم ايمني ذاتي در ماهيان به‌عنوان يك پپتيد ضد باكتريايي بخصوص در برابر باكتري‌هاي گرم مثبت شناخته مي‌شوند. با توجه به قابليت انتقال اين آنزيم از مولدين به نسل بعد و همچنين كسب پيشرفت‌هاي اخير درزمينه ژنتيك مولكولي در استفاده از روش‌هاي نوين درزمينه آناليز mRNA با استفاده از روش Real Time PCR جهت اندازه‌گيري ميزان بيان ژن‌هاي مختلف، مطالعه حاضر باهدف ارزيابي ميزان بيان ژن ليزوزيم نوع-C در بافت‌هاي كبد، قدامي كليه، پانكراس و طحال در ماهيان مولد قره برون (Acipenser persicus) با استفاده از روش مذكور مورد بررسي قرار گرفت. بدين منظور نمونه‌برداري از بافت‌هاي موردنظر در زمان تكثير مصنوعي اين‌گونه، پس از انجام عمليات تخم‌كشي، اسپرم‌گيري و كشتار از 16 عدد ماهي مولد (هشت عدد ماهي نر، هشت عدد ماهي ماده) انجام شد. RNA كل استخراج و سنتز cDNA از بافت‌هاي تفكيك‌شده انجام شد. در ادامه بيان mRNA ژن ليزوزيم نوع-C در بافت‌هاي مختلف با استفاده از تكنيك real time RT- PCR به‌وسيله ژن β-actin به‌عنوان كنترل داخلي مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج به‌دست‌آمده نشان داد ژن ليزوزيم نوع-C در تمام بافت‌هاي تحت بررسي بيان دارد و حداكثر تعداد نسخه‌هاي mRNA اين ژن در بافت طحال و كمترين تعداد آن در بافت پانكراس مشاهده شد (01/0 > p). درمجموع، با توجه به نقش عوامل مختلف مانند جنسيت، سن، اندازه، فصل، دماي آب، pH، مسموميت‌ها، عفونت‌ها و درجه عوامل استرس‌زا در ميزان فعاليت و يا سطوح آنزيم ليزوزيم كه درنهايت ممكن است باعث فعال شدن مستقيم رونويسي ژن ليزوزيم گردند و اهميت ماهيان مولد خاوياري مي‌توان بيان نمود كه اين ژن به‌خوبي مي‌تواند به‌عنوان يك ژن مرجع به‌منظور پيش‌آگاهي، شناسايي و غربالگري ماهيان مولد بيمار و درمان آن‌ها و كنترل محيط‌زيست در اين‌گونه مورداستفاده قرار گيرد.

Lysozymes are important proteins of the innate immune system for the defense against bacterial infection, especially gram-positive bacteria in fishes. According to the ability to transfer this gene from breeders to the next generation, as well as recent advantage-ground in molecular genetics on applying novel methods in the field of mRNA analysis using real time RT-PCR to measure the expression of the different genes, the present study was conducted to evaluate the expression of the C- type lysozyme gene in tissues of liver, head of kidney, pancreas and spleen in breeding of Acipenser persicus. For this purpose, tissue sampling was done after artificial breeding from 16 fish (8 males and 8 females). The tissues were transported to the laboratory in liquid nitrogen. Total RNA was isolated and cDNA synthesis was performed from resected tissues. The mRNA expression of the C-type Lysozyme gene in different tissues were detected by real time quantitative PCR with β-actin gene as an internal control. Expression of the c-type lysozyme gene was detected in all tested tissues. The maximum copy numbers of the mRNA expression of the C-type Lysozyme gene were detected in spleen tissue and the lowest expression of this enzyme was determined in the pancreas tissue (p < 0.01). Overall, considering the role of different factors such as sex, age, size, season, water temperature, pH, toxicants, infections and type of stressors in the lysozyme activity or level, which may have eventually caused the direct activation of transcription of lysozyme gene, as well as considering the importance of breeding of sturgeons, we could claim that this gene can well be used as a reference gene for the prognosis and screening of immune deficiency and control of their environment in A. persicus.