بررسي سلولي و مولكولي پيش سازهاي اندوتليال خون محيطي پس از جداسازي انتخابي و مقايسه ترانسفكشن آن‌ها با دو روش ليپوفكشن و الكتروپوريشن

Cellular and molecular evaluation of endothelial progenitor cells after selective isolation from peripheral blood and comparison of their transection by lipofection and electroporation

سابقه و هدف مغز استخوان بالغين حاوي رده‌اي از سلول‌هاي پيش ساز بوده كه اين سلول‌ها قابليت متمايز شدن به سلول‌هاي اندوتليال بالغ را دارا مي‌باشند. به اين سلول‌ها ، سلول‌هاي پيش‌ساز اندوتليال (EPC) گفته‌‌مي‌شود. مطالعه‌هاي باليني به منظور به‌كارگيري سلول‌هاي EPC جهت توليد عروق جديد در ارگان‌هاي ايسكميك شروع شده‌است. در اين پژوهش سلول‌هاي EPC از خون محيطي انسان جداسازي شده و با استفاده از روش ليپوفكشن ترانسفكت شدند. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربي بود. ابتدا كل سلول‌هاي تك‌هسته‌اي از خون محيطي جداسازي شده سپس در محيط كشت پايه سلول‌هاي اندوتليال و ديش‌هاي پوشيده شده با فيبرونكتين ، كشت داده شدند. در روز هفتم ، سلول‌هايي را كه از طريق اتصال به كف ديش‌ها قادر به رشد و تكثير بودند ، تريپسينيزه كرده و از ارزيابي‌هاي ايمونوسيتوشيمي و مولكولي ، جهت تأييد ماهيت اندوتليالي آن‌‌‌ها استفاده شد. سپس دو روش الكتروپوريشن و ليپوفكشن جهت ترانسفكشن آن‌ها به‌كار گرفته شد. يافته‌ها نتايج به‌دست آمده از اين پژوهش نشان داد كه سلول‌هاي جداسازي شده بر روي سطوح پوشيده شده با فيبرونكتين رشد مي‌كنند و در روز هفتم علاوه بر اين كه قادر به جذب (AC-DIL (Acetylated low density lipoproteins هستند ، ژن‌هاي CD31 ، CD34 ، KDR ، VECAM-1 و Tie-1 را بيان نموده و پاسخ‌شان به آنتي‌بادي بر عليه آنتي‌ژن‌هاي CD31 ، CD34 ، KDR و لكتين مثبت است. همچنين سلول‌ها با استفاده از روش ليپوفكشن ترانسفكت شدند . نتيجه گيري از يافته‌هاي اين پژوهش مي‌توان نتيجه گرفت كه سلول‌هاي EPC انساني در روز هفتم ، ژن‌هاي مورد مطالعه را بيان مي‌كنند و اين سلول‌ها با استفاده از روش ليپوفكشن هر چند با كارايي پايين ترانسفكت مي‌شوند.

Background and Objectives Bone marrow of adults contains a subtype of progenitor cells that has the capacity to differentiate into mature endothelial cells and has therefore been termed as endothelial progenitor cells (EPCs). Clinical studies employing EPCs for revascularization of ischemicorgans have just started to be conducted. In the present research, endothelial progenitor cells were isolated from peripheral blood and transfected by lipofection method. Materials and Methods All mononuclear cells were isolated from peripheral blood by vivo expansion method and cultured in fibronectin coated dishes and basal EC medium. In day 7, the cells were tripsinized and examined by immunocytochemical and molecular evaluation methods; then, electroporation and lipofection methods were used for transfection of EPCs. Results Observations showed isolated cells were proliferated on fibronectin coated surfaces. The cells were able to incorporate Acl-Dil and express CD31, CD34, KDR, VECAM-1, Tie-1 genes, CD31, CD34, Lectin and KDR antigens. The cells were also transfected by lipofection method. Conclusions It can be concluded that hEPCs express specific endothelial genes in day 7 and are transfected by lipofection method with low efficiency.