ايجاد سلول هاي بنيادي شبه جنيني از بيضه موش نوزاد پس از تابش امواج فراصوت با شدت پايين

Production of embryonic stem like-cells from neonatal mouse testis after exposure to low-intensity ultrasound

هدف: سلول هاي بنيادي پرتوان مشتق شده از بافت بيضه، يك منبع بسيار غني و جديدي براي سلول درماني در پزشكي بازساختي هستند. مطالعات اخير نشانگر آن است كه سلول هاي بنيادي اسپرماتو گوني در شرايط آزمايشگاهي مي توانند به سلول هاي بنيادي شبه جنيني تغيير يابند. استفاده از امواج فراصوت با شدت پايين، آثار مثبتي روي رشد و تمايز سلول ها دارد. هدف از اين مطالعه تأثير امواج فراصوت روي كلوني زايي سلول هاي بنيادي شبه جنيني است. مواد و روش ها: ابتدا، سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني از بيضه نوزاد موش جدا شدند. بعد از كشت دادن اين سلول ها در محيط DM EM / F12 ، حاوي 15 درصد سرم جنين گاوي و عامل مهار كننده لوسمي، توسط امواج فراصوت باشدت 200 (ميلي وات بر سانتي متر مربع) به مدت 5 روز تحت تابش قرار گرفتند. سلول هاي بنيادي شبه جنيني توسط نشانگرهاي Sx2 و 1-SSEA تأييد شده و مشخصه هاي كلوني زايي سلول هاي بنيادي شبه جنيني ارزيابي شدند. نتايج: نتايج نشان داد كه افزايش معني داري در قطر و تعداد كلوني هاي سلول هاي بنيادي شبه جنيني در گروه تابش نسبت به گروه كنترل وجود دارد (0/05≥p) نشانگرهاي پروتئيني پر تواني سلول هاي بنيادي شبه جنيني از قبيل Sox2 و 1-SSEA بيان شدند. نتيجه گيري: امواج فراصوت با شدت پايين مي تواند روش مناسب و كم هزينه اي در بهبود بخشيدن كلوني زايي سلول هاي بنيادي شبه جنيني در زمان كشت باشد.

Objective: Pluripotent stem cells derived from testis are a new, unlimited source for cell therapy in regenerative medicine. Recently, studies show that spermatogonial stem cells can form embryonic stem-like cells (ES-like cells) in vitro. New procedures such as low intensity ultrasound (LIUS) can have positive effects on cell growth and differentiation. However, the effect of LIUS stimulation on ES-like cells has not been explored. In this study we investigate the effects of LIUS on colonization of ES-like cells. Methods: Initially, we isolated SSCs from neonatal mice. The spermatogonial and Sertoli cells were cultured together in DMEM/F12 supplemented with 15% fetal bovine serum (FBS) and leukemia inhibitory factor (LIF). ES-like cells were stimulated by LIUS at intensity doses of 200 millwatt/square centimeter (mW/cm2) over 5 days. Characteristics of the isolated cells were confirmed by immunocytochemistry with Sox2 and SSEA-1 protein for ES-like cells. We also investigated colonization features in the ES-like cells. Results: After 21 days, we observed there was a significant increase in diameter and number of colonies in the 200 mW/cm2 group compared to the control group (p≤0.05). Pluripotency proteins, ES-like cell marker Sox2, and SSEA-1 expressed in the ES-like cells. Conclusion: LIUS treatment can be an efficient, cost-effective method to improve colonization of ES-like cells during culture.