بهينه سازي توالي كدكننده فاكتور رشد فيبروبلاستي بازي انساني بمنظور بيان در گياه برنج و همسانه سازي آن تحت كنترل توالي هاي تنظيم كننده ژن ramy3D در ناقل دوتايي pCAMBIA1304

فاكتور رشد فيبروبلاستي بازي انساني (bFGF) يك پروتئين بسيار با ارزش با كاربردهاي گسترده درماني و تحقيقاتي است. در حال حاضر توليد اين فاكتور رشد بشكل نوتركيب در بسترهاي مرسوم ميكروبي و سلول هاي حشرات با مشكلاتي همراه است كه منجر به هزينه توليد بالا و در نتيجه محدود ساختن كاربرد آن شده است. كشت سلولي گياه برنج بستري كارامد، ايمن و كم هزينه براي توليد پروتئين نوتركيب است. هدف از اين تحقيق تهيه يك سازه بياني مناسب براي بيان بالاي نسخه بهينه سازي شده اي از فاكتور رشد انساني bFGF در كشت سلولي گياه برنج تحت كنترل عوامل تنظيمي ژن ramy3D بوده است. براي اين منظور ابتدا توالي كدكننده فاكتور bFGF بر اساس شاخص هاي كاربرد كدوني و محتواي GC براي بيان در گياه برنج بهينه سازي و در ادامه سنتز شد. بدنبال فرايند بهينه سازي، شاخص سازگاري كدوني از 0/76 به 0/82 و محتواي GC از 52/65 درصد به 55/45 درصد ارتقا يافت. توالي هاي تنظيم كننده ژن ramy3D برنج در قالب دو قطعه مجزا از روي DNA ژنومي تكثير و همسانه سازي شدند. در ادامه اقدام به سرهم سازي توالي هاي تنظيم كننده ژن ramy3D در ناقل دوتايي گياهي pCAMBIA1304 و سپس درج توالي كدكننده بهينه سازي شده ي bFGF در حدفاصل توالي پپتيد راهنما و 3′UTR شد. از جمله مزيت هاي سيستم بياني Ramy3D مي توان به ميزان بيان بالاي ژن انتقالي، القاپذير بودن و همچنين سهولت تخليص پروتئين بواسطه ترشح به محيط اشاره كرد.