مقايسـه روش‌هاي جداسازي توكسين كورينه باكتريوم ديفتريه سويه واكسينال استاندارد از طريق سپراتور و فيلترپرس به منظور افزايش كيفيت و كميت محصول نهايي

Comparison of the diphtheria toxin separation methods on standard vaccine strain using separator and filter presses to improve the quality & quantity of the final product

اين مطالعه مبتني بر افزايش و ارتقاء كيفيت و كميت مطلوب‌تر و موثر‌تر در توليد اين واكسن در كشور بود. در اين راستا دو روش (سپراتور و فيلترپرس) در جداسازي توكسين عامل مولـد بيماري يعني كورينه باكتريوم ديفتريه سويه‌ واكسينال از پيكره‌ باكتري‌هاي كشت يافته در فرمانتور، مورد بررسي و مقايسه قرار گرفت. سه سري ‌ساخت 350 ليتري كشت فرمانتوري ديفتري تهيه شد. جداسازي نيمي از آن در هر سري ‌ساخت، توسط استفاده از فيلترپرس به همراه كمك كننده‌ فيلتر (خاك دياتومه) و نيمي ديگر با استفاده از دستگاه سپراتور انجام شد. 3 نمونه از هر روش به ميـزان 50 ميلي‌ليتر از سه سـري-ساخت برداشته شد و آزمون‌هاي كمترين دوز كشنده، آزمون سمـيت اختصاصي، تيتر سم حاصـله به روش فولكولاسيون رامون و SDS-PAGE ژل‌الكتروفورزيس، بر روي نمونه‌ها انجام شد. ساير موارد همانند زمان صرف شده جهت رسيدن به محصول نهايي، حجم محصول و شفافيت محصول حاصل شده نيز مورد بررسي قرارگرفتند. نتايج حاصله در تمامي آزمون‌ها در روش جداسازي با سپراتور نسبت به روش جداسازي با فيلترپرس داراي برتري قابل ملاحظه‌اي بود. همچنين حجم محصول نهايي پس از جداسازي و شفافيت آن بروش سپراتور بهتر از روش فيلترپرس بود. مضافا اينكه زمان لازم براي جداسازي و هزينه هاي بكار رفته در روش سپراتور بمراتب كمتر از روش فيلترپرس بود. استفـاده از روش جداسـازي با سپراتور جايگزين مناسبي بر روش جداسازي توسط فيلترپرس در ميزان افزايش كيفيت و كميت توليد واكسن ديفتري مي‌باشد و از اين لحاظ ميتواند كيفيت و كميت واكسن توليدي را ارتقاء بخشد.

The aim of this research was based on increasing of the quantity, quality and effectiveness of this vaccine, protection of personnel and cost-benefit of production. In this regard two diphtheria toxin separation methods (Separator and Filter press) compared. Corynebacterium diphtheria (PW-8/CN-2000) was cultivated in 350L fermentor and half of the cultivation toxin clarified by Seitz filter press method and diatomea earth as filter aid and the rest was clarified by separator. Three sterile samples (50 mL) of each three produced batches were assessed by minimum lethal dose (MLD), specific toxicity test (STT), toxin flocculation titer (Lf, Kf – Ramon flocculation test) and SDS–PAGE. Other parameters like time consumption for toxin clarification with specific volume, quantity, product clarification, volume and clarification of product in two methods compared. The results confirmed that the separator clarification method was more advantageous to filter press. Also, volume and transparency of the final product after clarification by separator were better than Filterpress method. In addition, the separation time and costs used in the separator method were much less than Filterpress's method. In conclusion, use of separator clarification method was suitable alternative to current filter press method in terms of quantity and quality of diphtheria vaccine production.