مكان‌يابي رونوشت ژن Vasa در بافت بيضه ماهي آزاد درياي خزر (Salmo caspius) با شيوه دورگه‌سازي در محل (In Situ Hybridization)

دورگه‌سازي در محل، ابزار قدرتمندي در مكان‌يابي توالي خاصي از اسيد­هاي نوكلئيك در جمعيت ناهمگوني از سلول­ها است. از اين رو، مطالعه حاضر با هدف راه‌انداري اين شيوه، با استفاده از نشانگر Vasa در بافت بيضه ماهي آزاد درياي خزر (Salmo caspius) انجام شد. براي انجام اين مطالعه، ريبوپروب نشاندار شده با ديگوكسي ژنين (Dig) از پلازميد pGEMT حامل DNA مكمل ژن Vasa ماهي آزاد درياي خزر، توليد شد. نشاندار كردن RNA طي واكنش رونويسي در شرايط آزمايشگاهي با استفاده از Dig Labeling Mix انجام شد. براي دورگه‌سازي در محل بر روي بافت، ابتدا بافت بيضه بعد از جداسازي از ماهي آزاد نابالغ، تحت تثبيت و آب‌گيري بافتي قرار گرفت. پس از آب‌دهي مجدد و تيمار با پروتئيناز K، لام­ها با بافر دورگه‌سازي، حاوي ريبوپروب آنتي‌سنس Vasa انكوبه شدند. پس از شستشو با محلول SSC و انكوباسيون با آنتي‌بادي عليه ديگوكسي ژنين براي 16 ساعت، آشكارسازي با NBT/BCIP انجام شد. نتايج به دست آمده از اين پژوهش با استفاده از ريبوپروب آنتي‌سنس Vasa نشان داد كه همه سلول­هاي زايا (از سلول­هاي بنيادي اسپرماتوگوني تا اسپرماتوزوآ) اين ژن را به خوبي بيان كردند، اما شدت بيان آن در رده‌­هاي مختلف سلول­هاي زاياي گونه مورد مطالعه، متفاوت بود. بنابراين در اين مطالعه، ژن Vasa به عنوان نشانگر اختصاصي براي سلول‌­هاي زايا در اين ماهي و شيوه دورگه­سازي در محل به عنوان يك عامل كاوشگر، به منظور بررسي مكان رونوشت ژن‌ها در بافت بيضه ماهي آزاد، معرفي شد. اين يافته مي‌تواند كمك شاياني در شناخت بيشتر ما از چگونگي تشكيل سلول­هاي زايا و تكوين آن­ها در اين گونه ارزشمند درياي خزر داشته باشد.