كلون و بيان ژن vp1 ويروس تب برفكي و fliC سالمونلا در باكتري اشرشياكلاي

تب برفكي يك بيماري وزيكولي ويروسي است كه منجر به بروز خسارات وسيع در صنعت دامپروري مي گردد. امروزه براي كنترل اين بيماري از ويروس غيرفعال شده استفاده مي شود كه مهمترين نقطه ضعف آن كوتاه بودن طول دوره ايمني است.لذا تلاش هاي زيادي در زمينه بكارگيري ادجوانهاي موثر تر در فرمولاسيون واكسن صورت گرفته است. هدف از اين تحقيق توليد فيوژن پروتئين VP1 ويروس تب برفكي (Opanasia2) و فلاژلين سالمونلا (fliC)به عنوان يك ادجوانت ملكولي استژن 1Dكه مسئول سنتز پروتئين VP1است به طولbp 800 توسط  PCR تكثير داده شد و در وكتور PTZ57 كلون گرديد, سپس اين وكتور توسط آنزيم هايHindIII و XhoI برش داده شده و در داخل ناقل بياني pET41b كه حاوي ژن فلاژلين سالمونلا بود كلون گرديد. پلاسميد نوتركيب به باكتري Escherichia coli(BL21DE3) انتقال داده شد و بيان توسط IPTG(0.5 mM) القا گرديد. بيان پروتئين توسطSDSPAGE  در ژل آكريل آميد 12% و وسترن بلات مورد بررسي قرار گرفت. الحاق ژن هاي vp1و fliCبا استفاده از روش  PCR و هضم آنزيمي با دو آنزيم HindIIIو XhoIبا مشاهده باند هايي به طولهاي تقريبي bp700 و 1500 تاييد گرديد. براي خالص سازي از رزين NiNTA  و گراديان pH استفاده شد كه بيشترين ميزان بازيافت پروتئين در5/4 pHمشاهده گرديد. بيان پروتئين با مشاهده باند KDa76در آزمايش SDSPAGE در ژل 12% آكريل آميد ووسترنبلات توسطAntiHis دررسوب باكتريالقاءشده تاييدگرديد.با توجه به نتايج به دست آمده ژن فيوژن vp1 fliCsalmonella با طول 2200 bpكلون گرديده و پروتئين حاصل باوزنKDa76با موفقيت بيان و تخليص گرديد.