همسانه‌سازي و بيان آنزيم ليپواكسيژناز پوستي Ambystoma mexicanum (LOXe) در باكتري Escherichia Coli

مقدمه: آنزيم‌هاي ليپواكسيژناز نقش مهمي در انواع مكانيسم‌هاي موجودات زنده ايفا مي‌كنند. تا كنون مطالعات زيادي بر روي عملكرد ليپواكسيژناز در انسان و ساير موجودات انجام گرفته است. فعال شدن اين آنزيم در يوكاريوت‌ها و اثرگذاري روي سوبستراي خود (اسيد آراشيدونيك) باعث توليد واسطه‌هاي گوناگوني مي‌شود. يكي از محصولات واكنش اين آنزيم لكوترين است. اين واسطه‌ي التهابي نقش مهمي در فرايند ترميم زخم ايفا مي‌كند. مطالعات اخير نشان داده ‌است كه آنزيم ليپواكسيژناز LOXe استخراج شده از يك دوزيست (Ambystoma mexicanum) در مقايسه با ليپواكسيژناز انساني تأثيري به مراتب بيشتر در فرايند بهبود زخم از خود نشان مي‌دهد. تا به حال، همسانه‌سازي و بيان اين ژن در باكتري انجام نشده است و از آن جا كه اولين قدم براي شناسايي و تعيين ويژگي‌هاي هر پروتئين، در دست داشتن مقادير زيادي از آن است، در تحقيق حاضر، همسانه‌سازي و بيان ليپواكسيژناز اكسولوتل (LOXe) مورد توجه قرار گرفت. روش‌ها: ابتدا توالي كد كننده‌ي ليپواكسيژناز اكسولوتل بر اساس توالي آمينو اسيدي پروتئين مورد نظر، طراحي و پس از بهينه‌سازي كدون‌ها براي بيان حداكثري در باكتري E. coli (Escherichia coli)، در ناقل pUC57 قرار گرفت. قطعه‌ي كد كننده‌ي سنتز شده پس از هضم با آنزيم‌هاي برشي مورد نظر، در چهارچوب خواندن ناقل بياني pET21-a قرار داده شد و در ميزبان بياني BL21-E. coli براي بيان پروتئين 71 كيلو دالتوني LOXe (623 اسيد آمينه) در حضور IPTG (Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside) القا گرديد. يافته‌ها: كلونينگ LOXe با صحت انجام گرفت و بيان اين آنزيم در باكتري E. coli امكان پذير است. نتيجه‌گيري: آناليز SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) نشان دهنده‌ي بيان فراوان پروتئين مورد نظر در مقايسه با نمونه‌ي شاهد بود.