تفكيك و تايپينگ مولكولي گونه هاي بروسلا جداسازي شده از سقط جنين دام هاي اهلي در شمال و شرق ايران

Differentiation and molecular typing of Brucella species isolated from aborted of livestock in the North and East of Iran

بيماري بروسلوز يا تب مالت، همواره از دو بعد اقتصادي و بهداشتي حائز اهميت بوده به نحوي كه هر ساله خسارت هاي اقتصادي فراواني را براي سرمايه دامي كشور به بار مي‌آورد. از سوي ديگر از آنجايي كه بروسلوز يك بيماري مشترك بين انسان و دام مي باشد، اهميت موضوع از نظر بهداشت عمومي دو چندان مي‌شود. بنابراين لازم است با انجام مطالعات اپيدميولوژيك به عنوان گام اول، به سمت شناسايي عامل بيماري و سپس كنترل و كاهش موارد ابتلا به آن در كشور قدم برداشت. در اين مطالعه، 170 نمونه سقط جنين مربوط به گوسفند و گاو در طي سال هاي 94 تا 97 از استان هاي گلستان و خراسان رضوي جمع آوري گرديد. پس از كالبد شكافي، از ارگان هاي مختلف جنين‌ها در محيط كلمبيا آگار و مك كانكي كشت داده شد و با استفاده از رنگ آميزي گرم و تست هاي استاندارد بيوشيميايي، تمام نمونه ها مورد بررسي قرار گرفتند. در مجموع، 60 ايزوله بروسلا شناسايي گرديد. در نهايت با استفاده از تكنيك هاي مولكولي Bruce-ladder Multiplex PCR و ERIC-PCR، تفكيك گونه و تايپينگ مولكولي ايزوله هاي جداسازي شده انجام پذيرفت. از ميان 60 ايزوله شناسايي شده، 59 گونه مربوط به بروسلا ملي تنسيس و 1 گونه مربوط به بروسلا آبورتوس بود. تمامي ايزوله هاي شناسايي شده، عليرغم مناطق جغرافيايي متفاوت، داراي الگوي ژنتيكي مشابهي بودند. تكنيكBruce-ladder Multiplex PCR به عنوان يك روش سريع، دقيق و ايمن جهت شناسايي بروسلا در سطح جنس و گونه بسيار موثر است. با وجود اينكه تكنيك ERIC-PCR در بسياري از مطالعات روش قدرتمندي در تمايز مولكولي باكتري ها بشمار مي رود، در صورت امكان بهتر است كه براي تاييد نتايج اين مطالعه از تكنيك هاي دقيق تر و با قدرت تفكيك بالا همچون MLVA و MLST نيز استفاده گردد.

Brucellosis has always been among the most important economic and public health issues, somehow, each year it causes huge economic losses for the livestock industries. On the other hand, since brucellosis is a zoonotic disease, the importance of the issue in terms of public health is doubled. Therefore, it is necessary that by conducting epidemiological studies as a first step, identify the agent and then control and reduce the incidence of the disease. In this study, 170 samples were collected from aborted livestock in sheep, goats and cattle in the Golestan and Razavi Khorasan provinces, between 2015-2018. After the autopsy, different organs of the fetuses were cultured on the Columbia agar and MacConkey agar and then all of the samples were examined by using gram staining and standard biochemical tests. Overall, 60 Brucella spp. isolates were recovered and eventually, molecular typing and identification of Brucella spp. were conducted by using molecular techniques including Bruce-ladder Multiplex PCR and ERIC-PCR. Out of 60 Brucella spp. isolates, 59 strains were identified as Brucella melitensis and 1 strain as Brucella abortus, also all isolates despite their different geographic locations, had the same genetic patterns. The Bruce-ladder Multiplex PCR seemed to be a quick, safe and cost-effective method for molecular identification of Brucella isolates at the genus and species level. Although the ERIC-PCR technique in many studies is a powerful method for molecular differentiation of bacteria, it is better to use more precise and high-resolution techniques such as MLVA and MLST for confirmation the results of this study.