ساخت سازه‌ي ژني pBud.CE4.1 IFNβ Wild Type و بررسي سطح بيان ژن اينترفرون بتاي انساني در رده‌ي سلولي HEK293 ترانسفكت شده با اين سازه

مقدمه: اينترفرون بتا، از جمله سايتوكاين‌هاي مهمي است كه در پاسخ به عوامل محرك و آنتي‌ژن‌ها بيان مي‌شود و در فرايندهاي ايمني و التهاب نقش دارد. در اين پژوهش، ضمن كلون نمودن ژن اينترفرون بتا در وكتور pBud.CE4.1، سطح بيان اين ژن در مقايسه با حالت بيان پايه در رده‌ي سلولي انساني HEK293 با استفاده از روش Real-time PCR (Real-time polymerase chain reaction) بررسي گرديد. روش‌ها: توالي ژن اينترفرون بتا با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي حاوي جايگاه برش آنزيمي KpnI و BglII از روي وكتور pSVMdhfr حاوي اين ژن تكثير شد و سپس، در وكتور pBud.CE4.1 خطي شده با آنزيم‌هاي پيش‌گفته، كلون گرديد. ساختار وكتور نوتركيب، با استفاده از روش هضم آنزيمي، Colony PCR و تعيين توالي، بررسي و در نهايت، به درون باكتري مستعد Escherichia coli TOP10 ترانسفورم شد. پس از تكثير، پلاسميد نوتركيب استخراج و به رده‌ي سلولي HEK293 ترانسفكت گرديد. استخراج RNA، سنتز cDNA (Complementary DNA) و بررسي سطح بيان با استفاده از روش Real-time PCR صورت گرفت. يافته‌ها: ژن اينترفرون بتا، تحت پروموتر eEf1a وكتور با موفقيت در رده‌ي سلولي HEK293 بيان شد. سطح بيان اين ژن در اثر ترانسفكشن، 79/9 برابر افزايش نسبت به شاهد را نشان داد. ترانسفكت وكتور فاقد ژن، افزايش بيان 2/87 برابري را نشان داد كه احتمال مي‌رود، به علت ورود يك ژنوم بيگانه باشد. نتيجه‌گيري: پروتئين‌هاي توليد شده در سيستم‌هاي پروكاريوتي، فاقد گليكوزيلاسيون مي‌باشند و در نتيجه، خواص فيزيكوشيميايي متفاوتي نسبت به حالت طبيعي دارند. بنا بر اين، بيان ژن هدف در سلول انساني تحت پروموتر قوي وكتور انتخابي، از مزاياي پژوهش حاضر است. انجام مطالعات پروتئيني در اين زمينه، مي‌تواند هدف مطالعات آتي باشد.