الگوي بياني ژن p32 در بافت‌هاي ران، دست، راسته و چربي پشت بره كرماني

The expression pattern of p32 gene in femur, humeral muscle, back muscle and back fat tissues of Kermani lambs

هدف: مطالعات نشان داده‌اند كه p32 در بافت‌هاي فعال متابوليكي و به سرعت در حال رشد، مانند ماهيچه‌ها، تومورهاي سينه، اپيدرم و تخمدان به شدت بيان مي‌شود. يكي از اقدامات اساسي در حيوانات اهلي مطالعه ژن­ها و پروتئين­هاي مرتبط با صفات اقتصادي و مطالعه آنها در سطح سلولي يا كروموزومي است. هدف اين مطالعه، بررسي الگوي بياني ژن p32 در بافت‌هاي ران، دست، راسته و چربي پشت كمر بره كرماني بود. مواد و روش‌ها: نمونه‌برداري از بافت‌هاي ران، دست، راسته و چربي پشت كمر بره‌هاي نر كرماني (12 نمونه از 3 حيوان و از هر بافت 3 تكرار) انجام شد. پس از انجماد سريع نمونه ها در داخل فريزر 80- نگهداري شدند. RNA كل با استفاده از كيت استاندارد استخراج شد. كيفيت و كميتRNA استخراج شده با روش الكتروفورز روي ژل آگارز و با استفاده از دستگاه نانودراپ مورد ارزيابي قرار گرفت. براي سنتز cDNAاز كيت سنتز cDNA شركت parstous استفاده شد. براي بررسي ميزان نسبي بيان ژن‌ها از واكنش real time PCR به روش Syber Green استفاده شد. براي تجزيه و تحليل داده هاي حاصل از real time PCR از روش Pfaffl et al. استفاده شد. نتايج: بررسي كيفيت RNA­هاي استخراج شده نشان داد كه كيفيت مناسب و مطلوب است. مشاهده دو باند 18S و 28S در RNA نشان دهنده سالم بودن آن و عدم وجود باند اضافي نشان دهنده خلوص آن بود. الكتروفورز محصولات PCR روي ژل آگارز و نتايج منحني­هاي real time PCR نشان داد كه ژن p32 در بافت­هاي ران، راسته و چربي پشت كمر بره‌هاي نر كرماني بيان نشده است و فقط در بافت دست اين حيوانات تكثير شده است. مشاهده تك باند در محدوده bp281 براي ژن p32 در بافت­ دست و وجود باند در محدوده bp112 براي ژن بتااكتين در همه­ نمونه­ها، بيانگر صحت انجام آزمايش و تكثير قطعه مورد نظر بود. نتيجه‌گيري: با توجه به اين كه در اين مطالعه بيان ژن p32 در گوسفند كرماني در سن 11 ماهگي مطالعه شد و بيان اين ژن بيشتر در دوران جنيني گزارش شده است، لذا عدم مشاهده بيان اين ژن در بافت‌هاي ران، راسته و چربي پشت و بيان پايين آن در بافت دست تاييد كننده نتايج مطالعات قبلي است. بيان كم اين ژن در عضله دست مي‌تواند حاكي از اين باشد كه اين عضله هنوز در اين سن داراي رشد است و يا ممكن است اين بافت سرطاني شده باشد، چرا كه اين ژن بيشتر در بافت‌هايي بيان مي‌شود كه در حال رشد سريع هستند و يا درگير سرطان هستند.

Objective Studies have shown that p32 is highly expressed in metabolically active and rapidly growing tissues, such as muscles, breast tumors, epidermis, and ovaries. One of the basic measures in domestic animals is the study of genes and proteins related to economic traits and their study at the cellular or chromosomal level. The aim of this study was to investigate the expression pattern of p32 gene in femur, humeral muscle, back muscle and back fat tissues of Kermani lambs. Materials and Methods Samples of femur, humeral muscle, back muscle and back fat tissues of Kermani lambs were collected (12 samples from 3 animals and 3 replicates from each tissue). After rapid freezing, the samples were stored in a -80 freezer. Total RNA was extracted using a standard kit. The quality and quantity of the extracted RNA were evaluated by agarose gel electrophoresis and using a nanodrop device. For cDNA synthesis, parstous cDNA synthesis kit was used. Real time PCR reaction by Syber Green method was used to evaluate the relative expression of genes. To analyze the data obtained from real time PCR, the Pfaffl method was used. Results The quality of the extracted RNAs showed that the quality is appropriate and desirable. Observation of 18S and 28S bands in RNA indicated that it was intact and that no additional bands indicated its purity. Electrophoresis of PCR products on agarose gel and the results of real time PCR curves showed that the p32 gene was not expressed in femur, back muscle and back fat tissues of Kermani male lambs and was amplified only in the humeral muscle tissue of these animals. The observation of a single band in the range of 281 bp for the p32 gene in the humeral muscle tissue and the presence of a band in the range of 112 bp for the beta actin gene in all samples indicated the accuracy of the experiment and the amplification of the fragment. Conclusion Considering that in this study the expression of p32 gene in Kermani sheep at the age of 11 months was studied and the expression of this gene has been reported more in the embryonic period, so no expression of this gene was observed in femur, back muscle and back fat and its low expression in the humeral muscle tissue confirms the results of previous studies. Low expression of this gene in the humeral muscle tissue may indicate that the muscle is still growing at this age or that the tissue may be cancerous, as this gene is more expressed in tissues that are growing rapidly or are involved in cancer.