بررسي مولكولي ژن هاي مقاومت تتراسايكلين در باكتري شيگلا سونئي جدا شده از نمونه باليني و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بيان ژن مقاومت به روش Real time- PCR

مقدمه: شيگلا (Shigella) باسـيل گـرم منفـي روده اي كـه عفونـتهـاي ناشـي از آن مـشكلات جـدي را در كـشورهاي پيشرفته و در حال توسعه ايجاد كرده اسـت. شيوع عفونـتهـاي ناشـي از شـيگلا بـه دليـل دوز پـايين بيماريزايي اين باكتري و همچنين انتقال آسان آن از فـردي بـه فرد ديگر و نيز آلوده شدن غيرمستقيم افـراد از طريـق مـصرف مواد غذايي و آب آلوده بسيار آسان است.  جداسازي شيگلا سونئي از مدفوع كودكان, تاثير و جداسازي عصاره گياه علف چشمه, جدا سازي مولكولي ژن هاي تتراسايكلين با روش مالتي پلكس PCR و  تاثير عصاره بر بيان ژن مقاومت تتراسايكلين باروش مالتي پلكس PCR است.روش كار: از تعداد 60 سوش شيگلا سونئي جدا شده از كودكان مبتلا به اسهال پس از ايزولاسيون سويه ها بر روي محيط هاي افتراقي و محيط  كشت (MAC) MacConkey Agar از نظر شكل و رنگ كلني ها بررسي و ثبت شد. ابتدا DNA ي هر يك از نمونه ها توسط كيت استخراج DNA استخراج شد و پس از استخراج نسبت به تكثير DNA الگو به روش PCR اقدام شد. براي بررسي اثر مقاومت آنتي بيوتيكي گياه علف چشمه نسبت به ژن استخراج شده مقاوم به داروي تتراسايكلين، MIC عصاره گياه بر روي غلظت هاي مختلف باكتري شيگلا سونئي بررسي شد. از سويه هايي كه واجد ژن هاي مقاوم به تتراسيكلين مي باشند با در نظر گرفتن  MIC، با استفاده دو گروه تيمار و غير تيمار، پس از انكوباسيون 18 ساعته stationary lag log با استفاده از كيت استخراج RNA x plus استخراج RNA انجام شد. سپس با استفاده از دستگاه RT PCR ABI plus  ميزان بيان ژنtet A  و tet B در دو گروه تيمار و غيرتيمار تحت تاثير عصاره گياه علف چشمه بصورت كمي (عددي) CT خوانده شد و بيان ژن تحت تاثير تيمار، تفسير گرديد.نتايج: نتايج ايزوله شيگلا سونئي درصد بالايي از بيشترين مقاومت به استرپتومايسين، ناليديكسيك اسيد، تتراسايكلين و آمپي سيلين و كلرامفنيكل با 100%، 100%، 86.7% و 91.8% % و 50 % مشاهده شد. هم چنين بيشترين حساسيت به جنتامايسين و سيپروفلوكساسين با 85% و 86.6% مشاهده شد. نتايج PCR چند گانه نشان داد كه، از تمامي 60 ايزوله شيگلا سونئي ، 3 ايزوله فقط داراي ژن tetB (5%) 55 ايزوله داراي ژن tetA (91.6%)، بودند. نتايج حاصل از آزمون فيشر حاكي از آنست كه در سطح خطاي 5 درصد ارتباط معناداري بين ژنهاي tetA و مقاومت به آنتي بيوتيك ها وجود داشته است (p value 0.05) نتايج حاكي از آن بود كه در سطح خطاي 5 درصد ارتباط معناداري بين ژنهاي tetB با مقاومت به آنتي بيوتيك ها وجود نداشته است(p value = 0.05). نتايج حاكي از آن بود كه در سطح خطاي 5 درصد ارتباط معناداري بين ژنهاي مثبت و منفي كليه ژنها با مقاومت به آنتي بيوتيك ها وجود نداشته است(p value 0.05).نتيجه گيري: در نتيجه آنكه مقاومت چندگانه در ايزوله هاي شيگلا به اكثر آنتي بيوتيك ها از جمله تتراسايكلين، كرامفنيكل، آمپي سيلين، كوتريموكسازول، ناليديكسيك اسيد و فلوروكينولون ها و هم چنين سفالوسپورين هاي نسل سوم در نقاط مختلف جهان رو به افزايش است. پارامتر Fold change نيز بيانگر ميزان Fold change   گروه تيمار نشده نسبت به گروه تيمار شده مي باشد. ميزان Fold Change براي ژن tetA برابر 1.21 كه نشان مي دهد اين ژن در گروه تيمار شده با عصاره گياه علف چشمه نسبت به گروه غير تيمار شده 1.21برابر كاهش يافته است.