مطالعه‌ي القاي اتوفاژي و مرگ سلولي در سلول ‌هاي MCF-7 در حضور كوئرستين

در اين مطالعه، امكان وقوع اتوفاژي مرگ در حضور كوئرستين به روي سلول‌هاي MCF-7 مورد بررسي قرار گرفته است. در ابتدا غلظت موثر از كوئرستين براي نابودي 50 درصد از سلول‌ها (LC50) با استفاده از روش MTT مشخص و معادل M 220 تعيين شد. براي تعيين نوع مرگ سلولي از روش فلوسيتومتري و نشانگرهاي ويژه‌ي آن شامل Annexin-FITC و PI استفاده گرديد. براين اساس، نوع اصلي مرگ سلولي در تيمار سلول‌ها با كوئرستين، آپوپتوز و درصد آن معادل 54% تشخيص داده شد.در روش real time RT-PCR ژن‌هاي p53، Bax، Bcl-2 و casp-3 در رابطه با مسير آپوپتوز مورد توجه قرار گرفت. مطالعات ما نشان داد كه كاهش معنادار مشاهده شده در بيان Bcl-2، با توجه به نقش ضدآپوپتوزي آن، نمايانگر افزايش حساسيت سلولهاي سرطاني پستان نسبت به مرگ آپوپتوزي در حضور كوئرستين ميباشد. افزايش مقدار عددي مربوط به نسبت Bax/Bcl-2 نشان مي‌دهد كه علي‌رغم ثبات مضاهده شده در بيان ژن Bax،افزايش حساسيت سلولها نسبت به آپوپتوز از طريق كاهش بيان Bcl-2 امكان‌پذير مي‌باشد.به منظور بررسي اثرات كوئرستين در القاي مسير اتوفاژي، ژن‌هاي mTOR، LC3، Beclin-1 و DRAM انتخاب شدند و تغييرات بيان آنها در حضور كوئرستين مورد مطالعه قرار گرفت. كاهش سطح بيان ژن mTOR، در كنار افزايش شديدي كه در بيان LC3 مشاهده مي‌شود، مجموعا وقوع اتوفاژي را به اثبات مي‌رساند.اين موضوع با استفاده از آنتيبادي LC3II و بهره‌گيري از روش ايمونوسيتوشيمي نيز مورد تاييد قرار گرفت. يافته‌هاي ما نشان داد كه كوئرستين توانايي نابودي سلول‌هاي سرطاني پستان را از طريق اتوفاژي مرگ دارا مي‌باشد.