ناك‌اوت ژن ميوستاتين‎ ‎با استفاده از فناوري ‏CRISPR/Cas9‎‏ به‌منظور توليد رويان گوسفند وراميني ‏ناك‌اوت‌شده

ژن ميوستاتين (MSTN)) نقش مهمي در تنظيم توده عضلاني اسكلتي ايفا مي‌كند و مهار ترجمه‌اي اين ژن نشان‌دهنده افزايش توده عضلاني است كه به‌عنوان فنوتيپ دو ماهيچه‌اي شناخته مي‌شود. اختلال در بيان ژن MSTN با استفاده از تكنولوژي ويرايش ژنوم CRISPR/Cas9 رشد عضلاني و نرخ رشد را در گونه‌هاي دام از جمله گوسفند و بز نشان داده است. اين پژوهش به‌منظور توليد رويان‌‌هاي گوسفند وراميني حامل ژن MSTN  ناك‌اوت شده و بررسي اين رويان‌‌ها انجام شد. در مرحله اول، براي طراحي و انتخاب RNA راهنما از نرم‌افزار CRISPOR (http://crispor.tefor.net/) براي غربالگري اوليه استفاده شد. دو RNA راهنما كه اگزون يك ژن MSTN را هدف قرار مي‌دهند انتخاب شدند. سپس به ميزان 50 نانوگرم از مخلوط دو RNA راهنما به‌همراه Cas9 mRNA به‌صورت هم‌زمان به تخمك‌‌ها ريز تزريق شد. از بين 12 رويان توليدشده پنج رويان ماركر تكنولوژي CRISPR را نشان دادند. نتايج توالي‌يابي نشان داد دو نوع جهش براي RNA راهنما يك و RNA راهنما دو به‌صورت جداگانه يافت شد، اما هر دو نوع از RNA راهنماها به‌صورت هم زمان در هيچ‌يك از رويان‌ها عملكرد نداشتند. درصد برش سلول با سايت Synthego، 83 درصد گزارش شد. توالي نوكلئوتيدي اگزون يك MSTN ثبت‌شده در NCBI با توالي گوسفند وراميني متفاوت بود. براساس نتايج حاصل، بعد از جهش ايجاد شده در ژن MSTN با سيستم CRISPR/Cas9  توالي اسيدآمينه‌اي رويان‌هاي ناك‌اوت شده ژن MSTN در مقايسه با توالي اسد آمينه اي گروه كنترل كد خاتمه را نشان دادند.