تضعيف علايم ناشي از ويروس كوتولگي بادام زميني مرتبط با جهش غيرمعمول در ژنوم ويروس

ويروس هاي گياهي، بويژه آنهايي كه در طبيعت با ناقل منتقل مي شوند، در گلخانه ممكن است متفاوت از محيط بيرون عمل كنند. آزمون هاي زيستي به عنوان قديمي ترين روش هاي رديابي ويروس كه هنوز هم مورد استفاده قرار مي گيرند شامل مايه زني گياه ميزبان و بررسي بروز علايم در گلخانه يا آزمايشگاه مي باشد. به هنگام نگهداري ويروس كوتولگي بادام زميني (Peanut stunt virus (PSV)) در گلخانه با علايم تضعيف شدۀ نژاد ب پس از هشت بار پاساژ در گياه تنباكو (Nicotiana benthamiana) مواجه شديم. براي تعيين اينكه آيا تغييراتي در ژنوم جدايۀ ب بوجود آمده است ذرات ويروس از گياه آلوده تخليص و آر ان اي از ذرات ويروس با استفاده از تيمار با فنول/ كلروفرم استخراج گرديد تا پروتئين پوششي ويروس حذف شود و به دنبال آن ترسيب با اتانول انجام گرفت تا آر ان اي ويروس مورد تخليص قرار گيرد. آنگاه الكتروفورز آر ان اي هاي ويروسي روي ژل آگاروز نشان داد كه قطعۀ آر ان اي 3 (RNA3) نژاد PSV-B بزرگتر از قطعۀ مشابه در جدايۀ مرجع اين نژاد مي باشد كه حكايت از بوجود آمدن نوكلئوتيدهاي مضاعف درج شده در قطعه مورد نظر را داشت. براي تأييد اين مشاهدات، cDNA منطبق بر RNA3 از طريق RT-PCR با آغازگرهاي انتهاي 5 و 3 ساخته شد كه بر اساس ترادف هاي انتهايي RNA3 (رس شمار PSU31366)  طراحي شده بودند. قطعۀ حاصل از  RT-PCR مورد ترادف يابي با روش ترادف يابي چرخ ه اي دي داكسي قرار داده شد و داده هاي حاصله مورد مقايسه با ترادف هاي PSV RNA3 قرارگرفتند. اين بررسي آشكار نمود كه تكراري به اندازۀ 183 نوكلئوتيد در انتهاي 3 پريم ترجمه نشوندۀ RNA3 بوجود آمده است كه حاكي از رابطۀ بين اين جهش (تكرار) و تضعيف علايم بود. نتايج اين تحقيق تأكيد بر اين دارد كه در مطالعات گلخانه اي، پاساژهاي پي در پي ويروس منجر به بروز جهش يافته هاي ويروسي مي شود. اين مشاهدات همچنين در رابطه با حفاظت گياه نيز داراي پيآمد مي باشد براي اينكه واريانت-هاي جهش يافته و تضعيف شدۀ ويروس را مي توان به عنوان نژاد ملايم در حفاظت گياه به كار برد.