مطالعه اثر ضدسرطاني عصاره اتانولي جلبك سبزDunaliella salina جدا شده از درياچه حوض سلطان بر رده سلولي Squamous cell carcinoma در شرايط آزمايشگاهي

استفاده از گياهان آبزي به واسطه داشتن تركيب‌هاي مختلف در پيشگيري و درمان بيماريها از حدود 3000 سال پيش در چين رايج بوده است. جلبك سبز دوناليلا (Dunaliella salina) نيز يكي از ميكروجلبك‌هاي اكوسيستم‌هاي دريايي است كه به‌واسطه داشتن تركيب‌هايي نظير كاروتنوييدها مخصوصاً بتا-كاروتن، رتينال، آپوكاروتنوييدها، كتون‌ها، آلدهيدها و اپوكسيدها كه با ساختار شيميايي خاص و روشهاي بيوشيميايي مي‌توانند اكسيژن تكي را دفع كنند و جاذب راديكال‌ها باشند. در مطالعات زيادي خاصيت ضدسرطاني و ضداكسيداني اين تركيب‌ها ثابت شده است. در اين مطالعه از سلول‌هاي سرطان پوست استفاده شد. ويژگي بارز اين نوع سرطان پوست وجود سلول‌هاي گسترش‌يافته پهن و فلس‌مانند است. هدف از اين مطالعه بررسي اثر كشندگي عصاره اتانولي جلبك دوناليلا جدا شده از درياچه حوض سلطان بر روي ميزان مرگ و مير رده سلولي سرطان پوست با استفاده از نمك تترازوليوم در شرايط آزمايشگاهي بود. براي اين منظور دوناليلا سالينا از درياچه حوض سلطان در شمال شرقي قم برداشت، شناسايي و خالص‌سازي گرديد. جلبك در محيط كشت جانسون كشت داده شد. توده جلبكي پس از برداشت و شستشو با بافر نمكي فسفات (Phosphate Buffered Salts (PBS)) در برودت خشك و براي تهيه عصاره اتانولي آماده شد. رده سلولي A431 از انستيتو پاستور تهيه و در محيط كشت RPMI (Royal Park Memorial Institute) حاوي سرم جنيني گاوي10% كشت داده شد. سلول‌ها در حضور غلظت‌هاي مختلف 0، 25/6، 5/12، 25، 50، 100 ميكروگرم در ميلي‌ليتر از عصاره در فواصل زماني 6، 24، 48 ساعت در انكوباتور با دي‌اكسيدكربن 5% قرار داده شد. نتايج آماري داده‌ها نشان داد كه بين غلظت‌هاي مختلف عصاره در زمان‌هاي 24 و 48 ساعت از نظر مرگ و مير سلول‌هاي سرطاني اختلاف معني‌داري وجود دارد (05/0P < )، ولي در زمان 6 ساعت سطح معني‌داري مشاهده نشد (05/0P < ). LC50 عصاره در غلظت‌هاي مختلف بر روي رده سلولي سرطان پوست در فواصل زماني گرمخانه‌گذاري 6، 24، 48 ساعت ارزيابي شد. نتيجه LC50 پس از گذشت زمان 48 ساعت 6/46 ميكروگرم در ميلي‌ليتر بدست آمد. عصاره اتانولي جلبك دوناليلا جهت سنجش ميزان بتا-كاروتن موجود در آن توسط HPLC آناليز شد. نتايج بدست آمده از اين مطالعه، اثر كشندگي عصاره اتانولي جلبك دوناليلا سالينا را بر روي رده سلولي A431 نشان مي‌دهد. به‌طوري كه با افزايش غلظت عصاره و افزايش انكوباسيون مرگ و مير سلول‌هاي سرطان پوست نيز افزايش مي‌يابد. پس دوناليلا مي‌تواند به‌عنوان يك عامل شيميايي و جلوگيرنده قوي رشد براي اين رده سلولي مطرح باشد.

Aquatic plants have been used prevalently in China since 3000 years ago due to having various chemical compounds for diseases prevention and cure. Dunaliella salina is one of the micro algae in marine ecosystems containing beta-carotene, retinal, apocarotenoides, ketones, aldehydes and epoxides which enable it to absorb free radicals and produce singlet oxygen. In many studies, the anti-cancer and anti-oxidant effects of these chemical compounds have been confirmed. In this study, squamous cell skin cancer was used. The main goal of this research was to study the killing effects of the ethanol extract from the mentioned alga against Squamous cell carcinoma in vitro through using tetrazolium salt under in vitro conditions. Dunaliella Salina was collected from Hoz-Soltan Salt Lake located in the northeast of Qom. Algae were cultured on Johnson Medium. Algae mass were purified with PBS and then freeze dried. A431 cell line obtained from Pasteur Institution was cultured in RPMI medium containing FBS 10%. Cells were incubated with 5% CO2 in presence of different concentrations 0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 100 ?g/ml of extracts in time periods of 6, 24, and 48 hours. Results of the statistical analysis showed that there was a significant difference among various extract concentrations on death cells in 24 h and 48 h incubation (P < 0.05). Lc50 of different concentrations of extract against skin carcinoma cell line were evaluated in incubation period of 6, 24, and 48 hours. Lc50 results after 48 hours showed value of 46.6 6 ?g/ml. The ethanol extract of Dunaliella algae was analyzed by HPLC in order to evaluate the available beta carotene in algae. Our results confirm the killing effect of ethanol extract of Dunaliella against line Squamous cell carcinoma. With increasing extract concentration and incubation time, death of cells on the skin cancer cell line increased. Therefore, Dunaliella can be considered as a strong chemopreventive agent and anti cancer against this cell line.