مطالعات تجربي كنشهاي متقابل بين بافت بلاستما و ماتريكسهاي سه بعدي سلول زدايي شده مثانه خرگوش نژاد نيوزيلندي در شرايط in vitro

Experimental studies of interactions between blastema tissue and three-demensional matrixes decellularized of New Zealand rabbit bladder in vitro

چكيده: هدف: هدف اصلي اين پژوهش مطالعات تجربي رويدادهاي هيستولوژيكي حاصل از اعمال متقابل بين بافت بلاستما و مثانه سلول زدايي شده خرگوش نيوزيلندي در محيط كشت بود. مواد و روش‏ها: سلول‏زدايي مثانه خرگوش بر اساس روش فيزيكي با قرار دادن قطعات بافت مثانه در فريزر 4- درجه سانتي‏گراد به مدت 24 ساعت و سپس قرار دادن مثانه در ازت مايع انجام شد. در ادامه در روش شيميايي? مثانه را در سديم دودسيل سولفات(SDS) 1 درصد به مدت 24 ساعت قرار گرفت و سلول‏زدايي مثانه بطور كامل انجام شد. براي تهيه بافت بلاستما با پانچ لاله‏هاي گوش خرگوش نر نژاد نيوزيلندي و برداشت حلقه بلاستمايي ايجاد شده با پانچ ديگري بعد از 72 ساعت داربست سلول‏زدايي شده در شرايط استريل در مركز حلقه بلاستما قرار گرفت و به محيط كشت انتقال داده شد. نمونه‏هاي كشت بعد از انجام مراحل بافتي با رنگ‏هاي هماتوكسيلين ايوزين? پيك انديگو و پيكروفوشين رنگ آميزي شد. نتايج: مطالعات ميكروسكوپ نوري نشان داد كه سلول‏هاي بلاستمايي در روز 15 كشت به صورت كلني‏هاي سلولي داراي اتصال بطور كامل به داخل داربست سلول‏زدايي شده مثانه مهاجرت كرده‏اند. همچنين دراين روز سلول‏هاي بلاستمايي به سلول‏هاي اپيتليومي تمايز يافته و به نظر مي‏رسد اپيتليوم پلي‏مورف مثانه در وسط داربست تشكيل شده است. همچنين در روزهاي ديگر كشت رويدادهايي از فرايند انژيوژنز در داربست مذكور مشاهده گرديد. نتيجه گيري: مثانه سلول‏زدايي شده خرگوش نيوزلندي به عنوان داربست، قابليت القا سلول‏هاي بلاستمايي را در جهت مهاجرت به داربست? ايجاد اتصالات بين سلول‏هاي بلاستمايي و تمايز فراهم نموده است. كليد واژگان: داربست بدون سلول? مثانه? خرگوش نيوزيلندي? ماتريكس سه بعدي

Abstract Aim: The histological events in experimental studies of interaction between blastema tissue and decellularized bladder of New Zealand rabbit invitro was the aim of this investigation. Material and methods: In order to decellularization of rabbit’s bladder, in physical way, the pieces of bladder tissue were frozen at -4°c for 24 hours, and kept in liquid nitrogen. In chemical Method, the bladder in 1% wt/vol solution of sodium dodecyl sulfate (SDS) for 24 hours to decellularization was kept. For blastema tissue preparation with the help of a special punch, New Zealand rabbit ear (pinna) was pierced, after 72 hours with the help of another puncher, a circular blastema from the edge of holes was separated and the decellularized samples were kept in to the middle of the blastema ring and then, transfered to the culture media in a sterile condition. The samples with hematoxylin & eosin, pick indigo and pickrofushin (van gaison) were stained. Results: In this study, the studies of light microscopy showed that, colonial cells that connected together were perfectly migrated inside the scaffold on the day 15. On the same day, the blastema cells were differentiated to epithelial demensional matrix cells and bladder transitional epithelium created in the center of scaffold. Angiogenesis was observed in scaffold on the next days. Conclusion: It appears, the decellularized bladder of New-Zealand rabbit as a bio-scaffold is capable to provide a proper environment, induce blastema cells to migrate into the scaffold and create connections between blastema cells and differentiation . Keywords: Acellular scaffold, Bladder, New Zealand rabbit, 3D Matrix