جستجوي سالمونلا به روش‌هاي تكثير ژن invA و كشت باكتريايي در مدفوع تك‌سمي‌هاي اروميه

Detection of salmonella carriers using invA gene amplification and bacterial culture in Urmia equine feces

سالمونلوز يكي از بيماري‌هاي باكتريايي مشترك بين انسان و دام بوده كه توسط سرووارهاي سالمونلا ايجاد شده و با علايم سقط، اسهال و اسهال خوني شناخته مي‌شود. با توجه به اهميت بيماري در تك‌سمي‌ها مطالعه‌اي با اهداف 1) جستجوي ژن عامل تهاجم سالمونلا invA در سالمونلاها در مدفوع تك سمي‌ها به روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR)، 2) تعيين سرعت و حساسيت روش PCR در مقايسه با روش‌هاي معمول كشت ميكروبي و 3) تعيين ميزان حاملين سالمونلاهاي بيماري‌زا با توجه به جنس، سن و گونه تك سمي انجام گرديد. مقدار 15 گرم مدفوع تعداد 100 راس تك‌سمي شامل 76 راس اسب (67 راس نريان و 9 راس ماديان) و 24 راس قاطر (16 راس نريان و 8 راس ماديان) در سال 1388 از مناطق مختلف اروميه تهيه گرديد. پراكندگي سني دام‌ها در 5 گروه سني تا 4، 6، 8، 10 و بالاي 10 سال به ترتيب 7، 24، 37، 19 و 13 راس بودند. نمونه‌هاي مدفوع ابتدا كشت و آزمايشات بيوشيميايي براي جداسازي سالمونلاها به كار گرفته شد. جهت استخراج بهتر DNA از مدفوع، نمونه‌ها ابتدا به مدت 18 ساعت در محيط‌هاي غني كننده قرار گرفته و سپس از روش Chloroform، Phenol و Isoamyloalcohol استفاده گرديد. براي انجام PCR از پرايمرهاي اختصاصي ژن عامل تهاجم سالمونلاها invA)) با نام‌هاي S139 و S141 استفاده شد. نهايتاَ محصول PCR با بهره‌مندي از دستگاه الكتروفورز بر روي ژل آگارز 2/1% مورد بررسي قرار گرفت. نتايج حاصل از كشت ميكروبي در مدفوع تك‌سمي‌ها منفي بود در صورتي كه با به كارگيري روش PCR و حضور باند bp284 مربوط به ژن invA بر روي تصوير الكتروفورز حضور باكتري سالمونلا در نمونه‌هاي مدفوع تاييد گرديد. لذا در 3 راس (3%) از اسب‌هاي بررسي شده (نريان، با سن تقريبي 6 تا 8 سال) وجود باكتري سالمونلا به روش PCR به اثبات رسيد در صورتي كه قاطرها در هر دو روش منفي بودند. لذا مي‌توان نتيجه گرفت كه صرف نظر از حامل بودن نريان به سالمونلاهاي بيماري‌زا، سرعت و حساسيت بالاي روش PCR در مقايسه با روش‌هاي كشت و آزمايشات بيوشيميايي كارآيي مطلوبي را نشان مي‌دهد.

The polymerase chain reaction (PCR) and conventional cultivation methods were carried out to detect invasion gene A (invA) gene of Salmonella spp. in horses and muleʹs feces. The rapidity and sensitivity of PCR technique was comparison with microbiological culture were determined. Detection of the carrier rates on the basis of sex, age and animal species for Salmonella in equine feces was done. One hundred fecal samples were taken from equidea family included 76 horses (67 stallions and 9 mares) and 24 mules (16 stallions and 8 mares) from different regions of Urmia, Iran, in 2009. The frequency of age distribution in 2 to 4, 6, 8, 10, and > 10 years old were 7, 24, 37, 19 and 13 animals, respectively. Fecal samples were used for Salmonella isolation by current culturing techniques and biochemical testes. Samples were enriched in enrichment broth and DNA were extracted and amplified by PCR method using specific primers for Salmonella invA. PCR products were visualized using 1.2% agarose gel electrophoresis. The bacterial culturing results were negative for all feces, whilst PCR and electrophoresis confirmed the presence of Salmonella in three feces (3%) in which they were stallion, 6 years old horses. These results indicate that the PCR method is highly sensitive and rapid for Salmonella detection in fecal samples than other current methods.