شماره ركورد
583293
عنوان مقاله
كلونينگ و بيان موقت ژن محافظتكننده سلولي، HO-1 ، در سلولهاي بنيادي مزانشيمال از طريق سيستم بياني آدنوويروس بر مبناي تكنولوژي Gateway
عنوان فرعي
Cloning and transient expression of cytoprotective factor, HO-1, in mesenchymal stem cells using the adenoviral expression system through Gateway technology
پديد آورندگان
حامدي اصل، پژمان نويسنده كارشناس ارشد خونشناسي ـ مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران Hamedi Asl, .P , حلبيان، راحله نويسنده , , محمدزاده ، محمد نويسنده , , محمديپور، مهشيد نويسنده PhD ژنتيك مولكولي ـ مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران Mohammadipoor, .M , بخشنده، زهرا نويسنده كارشناس ارشد خون شناسي، مركز تحقيقات انتقال خون، موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون، تهران، ايران Bakhshandeh, .Z , حامدي اصل، داريوش نويسنده كارشناس ارشد ميكروبشناسي باليني ـ انستيتو تحقيقاتي سرم و اكسنسازي رازي كرج ـ ايران Hamedi Asl, .D , كياني، علياصغر نويسنده PhD هماتولوژي و بانك خون ـ مرب دانشگاه علوم پزشكي لرستان ـ خرمآباد ـ ايران Kiani, .A.A , جليلي، محمدعلي نويسنده , , اميريزاده، ناصر نويسنده PhD هماتولوژي و بانك خون ـ استاديار مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ايران ـ صندوق پستي: 1157-14665 Amirizadeh, .N , حبيبي رودكنار، مهريار نويسنده ,
اطلاعات موجودي
فصلنامه سال 1391 شماره 36
رتبه نشريه
علمي پژوهشي
تعداد صفحه
12
از صفحه
214
تا صفحه
225
كليدواژه
Adenoviruses , genetic engineering , Heme oxygenase-1 , mesenchymal stem cells , هماكسيژناز - 1 , مهندسي ژنتيك , آدنوويروسها , سلولهاي بنيادي مزانشيمال
چكيده فارسي
چكيده
سابقه و هدف
HO-1 (هِماكسيژناز-1) يكي از عوامل قدرتمند محافظت كننده سلولي ميباشد. هدف از اين مطالعه، كلونينگ و بيان موقت ژن HO-1 انساني در سلولهاي بنيادي مزانشيمال(MSCها) با استفاده از سيستم بياني آدنوويروسي برمبناي تكنولوژي Gateway بود.
مواد و روشها
در يك مطالعه تجربي، به منظور القاي HO-1 ، رده سلولي 549A به مدت 1 ساعت با اشعه UV مواجه گرديد. cDNA توتال HO-1 جداسازي شد و از طريق واكنش كلونينگ TOPO به وكتور pENTR TOPO/D كلون گرديد. براي ايجاد كلون بياني، واكنش نوتركيبي LR بين كلون اوليه و وكتور مقصد(pAd/CMV/V5-DEST) به انجام رسيد. ويروس نوتركيب در رده سلولي يوكاريوتي مناسب تشكيل شد. MSCها به وسيله ويروس نوتركيب بيانكننده HO-1 آلودهسازي شدند.
يافتهها
نتايج نشان داد كه HO-1 انساني نوتركيب با موفقيت كلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحيح درون وكتور به وسيله تعيين توالي DNA تاييد شد. بيان HO-1 در MSCها به وسيله آناليز RT-PCR و وسترن بلات تاييد گرديد. اين نتايج حاكي از اين بود كه بيان HO-1 موقت است.
نتيجه گيري
بيان موقت ژن HO-1 انساني در MSCها با استفاده از سيستم بياني آدنوويروسي، ممكن است يك استراتژي انتقال ژني كارآمد در راستاي ارتقاي سلول درماني فراهم نمايد.
چكيده لاتين
Abstract
Background and Objectives
Heme oxegenase1 (HO-1) is one of the potent cytoprotective factors. The goal of this study was to perform cloning and transient over expression of the human HO-1 gene in mesenchymal stem cells (MSCs) using the adenoviral expression system based on the gateway technology.
Materials and Methods
In order to induce expression of HO-1, A549 cell lines were exposed to UV for 1 hour. The full length cDNA of HO-1 was isolated and cloned into pENTR TOPO/D vector by TOPO cloning reaction. To construct the expression clone, a LR recombination reaction was carried out between the entry clone and destination vector, pAd/CMV/V5-DEST. The recombinant virus was produced in the appropriate mammalian cell line. MSCs were infected by the recombinant virus expressing HO-1.
Results
The results showed that human recombinant HO-1 was successfully cloned and the accuracy of the gene and its frame in the vector were confirmed by DNA sequencing. Expression of HO-1 in MSCs was confirmed by RT-PCR and western blot analysis. The results indicated that the expression of HO-1 is transient.
Conclusions
Transient expression of human HO-1 gene in MSCs by using adenovirus expression system may be considered as an efficient gene transfer strategy into MSCs in order to promote stem cell therapy.
سال انتشار
1391
عنوان نشريه
خون
عنوان نشريه
خون
اطلاعات موجودي
فصلنامه با شماره پیاپی 36 سال 1391
كلمات كليدي
#تست#آزمون###امتحان
لينک به اين مدرک