انتقال و بيان ژن NGF در سلول‏هاي بنيادي مغز استخوان موش با استفاده از دو وكتور لنتي ويروسي HIV و FIV

NGF Gene Transfer to Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells Using FIV and HIV Based Lentiviral Vectors

هدف: در اين مطالعه ميزان انتقال بيان ژن توسط لنتي ويروس‏هاي مشتق از ويروس نقصان ايمني انساني “Human immunodeficiency virus”( HIV) با ميزان انتقال بيان ژن توسط لنتي ويروس مشتق از ويروس نقصان ايمني گربهImmunodeficiency virus (FIV) Felineبه سلول‏هاي مزانشيمي مغز استخوان موش مورد مقايسه قرار گرفت. مواد و روش‏ها: حامل هاي ويروسي با استفاده از وكتورهاي آماده، سلول‏هايHEK-293T ، شاتل‏هاي لنتي ويروسي با پايه‏هايHIV وFIV حامل ژن GFP به عنوان كنترل، وFIV وHIV حامل ژن Nerve growth factor))NGF توليد شدند. سپس سوپرناتانت سلول‏هاي HEK-293T حاوي ويروس‏هاي ساخته شده در معرض سلول‏هاي مزانشيمي مغز استخوان موش قرار گرفت. نتايج: نتايج نشان داد ‏كه سلول‏هاي مغز استخوان تيمار شده با وكتور HIV-NGF، NGF را بيان كردند. اما پس از تيمار با وكتور FIV-NGF، فاقد اين توانايي و قادر به بيان NGF نبودند. نتايج بيان NGF توسط نتايج انتخاب سلول‏ها، به وسيله آنتي بيوتيك، مورد تاييد قرار گرفتند. نتيجه گيري: لنتي ويروس‏هاي مشتق از FIV در مقايسه با لنتي ويروس‏هاي مشتق از HIV جهت آلوده سازي و بيان ژن خارجي در سلول‏هاي مزانشيمي مغز استخوان مناسب نيستند.

Aim: In this study, gene transfer efficiency of human lentiviral vector (HIV) into rat bone marrow stromal cells was compared with that of the feline lentiviral vector (FIV). Material and Methods: To produce lentiviral vectors, a triple transfection with a shuttle vector, a backbone which carries either the GFP gene as a control or the NGF gene, and an envelope vector was performed using calcium-phosphate method in HEK-293T cell line. Supernatants of HEK-293T cell line containing the produced viruses were then exposed to bone marrow stromal cells (BMSCs) of the rat. Results: While bone marrow stromal cells infected with HIV-NGF showed a relatively high immunoreactivity of NGF, those infected with FIV-NGF did not express NGF. Furthermore, BMSCs infected with FIV-NGF viruses containing antibiotic resistant gene could not survive in the culture media containing the antibiotic. Conclusion: FIV based lentiviral vectors may not have a desirable efficacy for gene transfer into bone marrow stromal cells. Keywords: ّFeline immunodeficiency virus lentiviral vector, Human immunodeficiency virus lentiviral vector, Bone marrow stromal cells, NGF