تشخيص سريع و حساس اونيكومايكوزيس در نمونه‏هاي باليني مشكوك به درماتوفيتوزيس ناخن (ترايكوفيتون روبروم) با استفاده از روش PCR

Rapid Detection of Trichophyton rubrum in Clinical Samples from Tinea Unguium using PCR

هدف: درماتوفيتوزيس يكي از رايج‏ترين بيماري‏هاي عفوني قارچي است كه در حال حاضر به صورت جهان‏گير درآمده و از مشكلات عمده بهداشتي و درماني در شهرها و روستاها به حساب مي‏آيد. اهداف مشخص اين مطالعه شامل اهداف آرماني، كلي، اهداف ويژه و كاربردي است كه عبارتست از تشخيص صحيح درماتوفيتوزيس ناخن، مقايسه حساسيت و دقت PCR با روش‏هاي معمول مستقيم و كشت براي شناسايي عوامل درماتوفيتوزيس ناخن و بررسي ارزيابي تريكوفيتون روبروم در بيماران مشكوك به درماتوفيتوزيس ناخن. مواد و روش‏ها: اين مطالعه يك بررسي توصيفي- تجربي بوده كه روي نمونه باليني ناخن 71 نفر از بيماران مشكوك به درماتوفيتوزيس ناخن صورت گرفت. نمونه‏هاي باليني يا تراشه‏هاي ناخن مشكوك، به سه بخش تقسيم شد كه روي هر قسمت آزمايش مستقيم، كشت و مولكولي انجام شد. در آزمايش مولكولي از آغازگرهاي يونيورسال قارچ (ITS1 و ITS4) و اختصاصي ترايكوفايتون روبروم (T-rub) استفاده شد. نتايج: در مطالعه حاضر براي اولين بار در ايران در ظرف كمتر از 5 ساعت و با استفاده از برنامه و روش اصلاح شده، استخراج DNA از بافت مستقيم ناخن آلوده صورت گرفت. همچنين مقايسه نتايج روش‏هاي آزمايشگاهي معمول مثل آزمايش مستقيم و كشت با روش PCR حساسيت و دقت بسيار زياد آن را نسبت به روش‏هاي ياد شده به اثبات مي‏رساند. نتيجه‏گيري: اين روش مي‏تواند با سرعت و دقتي كه دارد جايگزين بسيار مناسب و دقيق روش‏هاي معمول كشت و آزمايش مستقيم باشد.

Objective: Dermatophytosis is one of the most common pandemic fungal infections that is a major health problem in cities and villages. This study aims to evaluate PCR sensitivity and accuracy in the detection of nail dermatophytosis compared to conventional direct and culture detection methods, and performs an assessment of Trichophyton rubrum in patients suspected of having nail dermatophytosis. Methods: This experiment was a descriptive-experimental study carried out on 71 nail samples obtained from patients with suspected nail dermatophytosis. All clinical samples of nails or chips were divided into three sections and each section underwent direct examination, culture and molecular tests. In the molecular test, we used fungal rRNA universal primers (ITS1 and ITS4) and Trichophyton rubrum-specific primers. Results: In this study, for the first time in Iran and based on a modified protocol, DNA was directly extracted from tissues of infected nails in less than five hours. Additionally a comparison of the results obtained from routine laboratory methods such as direct examination and culture with PCR verified the high sensitivity and accuracy of PCR compared to the other studied methods. Conclusion: PCR, as a rapid, accurate method, can be a good replacement for conventional culture and direct examination.